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灰霉菌具有广寄主、耐低温、致病力强等特点,是一种重要的植物采后致病菌。菌株0023是一株分离自葡萄的灰霉菌,具有大量产孢的特性。本文以灰霉菌0023为材料,试验优化了聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化法,建立了适于灰霉菌0023的转化体系,并对转化方法进行详细描述。使用此法获得了携带荧光标记且致病力稳定的转化子。将转化子用于果实及小立碗藓侵染,发现小立碗藓具有良好的感病性,同时小立碗藓具有易于培养、世代交替明显和遗传信息明确的优势,是难得的用于病害互作研究的寄主材料。我们建立了灰霉菌与小立碗藓的病害互作体系,在荧光显微镜下观察灰霉菌荧光转化子侵染举动时,该病害互作体系具有明显优势。主要结果如下：1.PEG介导的原生质体转化法能够用于灰霉菌0023的转化。浓度为15mg/mL Lysing enzyme (Sigma L1412-25G)酶解液,25℃,100rpm,2h为制备原生质体最适酶解条件。2.40%PEG 3350用于转化,0.6M KCl高渗溶液及20%蔗糖浓度的SHA适于灰霉菌0023原生质体复苏,复苏时间为2周,复苏率为30%。3.启动子Olic和终止子Trpc适于外源基因在灰霉菌0023体内表达,每次转化需要量为1μg外源基因,用于107个/mL原生质体。以此法获得转化子比率为1/106。4.荧光转化子G1在激发光下发出绿色荧光,常温下培养5d长满平皿,第5d产孢量为4.25 104个/cm2,第3d乙烯释放量为1.19μL/h,低温对其生长影响不大,能够侵染葡萄及小立碗藓。以果实为寄主,不利于荧光转化子侵染举动观察。5.以BCDATG培养基培养的小立碗藓,滴加10μL灰霉菌孢子悬浮液,浓度为107个/mL,可导致小立碗藓迅速发病,病程为2周。6.能导致苔藓萎蔫的病原真菌总状毛霉也能够导致小立碗藓萎蔫,这是总状毛霉作为苔藓病原菌的首次报道。7.小立碗藓能够感受灰霉菌、总状毛霉及镰刀菌侵染,分别表现出萎蔫和坏死2种明显病症,接种荧光转化子后观察十分方便,适于病害互作研究。以此建立小立碗藓病害互作体系。本研究建立了适于灰霉菌0023的转化方法及外源基因表达体系,探讨了小立碗藓作为适于荧光转化子侵染举动观察的寄主材料,验证其对病害的敏感性,提出了建立灰霉菌与小立碗藓病害互作体系对病害研究的重要意义。