特种工业用油料作物Lesquerella fendleri L.的组织培养与遗传转化

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LesquerellafendleriL.由于种子油中含有一定的羟基脂肪酸(HFA),因此是一种非常有经济价值的工业用油料作物。本实验以叶片和叶柄为外植体,研究了L.fendleri的离体植株再生和根癌农杆菌介导的β-葡萄糖醛酸苷酶基因(Gus)和除草剂Basta的抗性基因(Bar)的遗传转化技术。   研究结果表明,L.fendleri的再生能力非常强。L.fendleri叶柄与叶片在许多激素组合的培养基上都能够诱导出愈伤组织。叶柄和叶片在MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.2mg/l先长出少量愈伤组织,然后直接分化出不定芽,作为最佳再生培养基。同时还得出结论,叶片的诱导效果要比叶柄的较好。   将农杆菌菌株EHA105/pCAMBIA1301和LBA4404/pCAMBIA2300-bar培养至OD600=0.8,离心收集,以相同体积的MS+As100μmol/L的液体培养基重悬,将叶片与叶柄在MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.2mg/l培养基上预培养2-3d,浸于上述感染培养基中100rpm摇动10min,转入分化培养基MS+6-BA0.5mg/l+NAA0.2mg/l+As100μmol/L中,28℃暗培养2-3d。   通过以上的筛选和鉴定证明Gus基因和Bar基因整合到L.fendleri基因组中并得到表达。同时,由EHA105/pCAMBIA1301的转化中,得出叶柄作为转化受体,转化频率要高于叶片。   
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