论文部分内容阅读
目的：
1、探讨EMs患者在位、异位子宫内膜与正常对照患者在位子宫内膜细胞的原代培养方法，为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型。
2、从基因水平对人参皂甙Rg3抗EMs血管生成作用进行研究，为研究人参皂甙Rg3抗EMs的作用机理及临床EMs抗血管生成治疗提供实验依据。
方法：
1、采用胶原酶消化法和组织块法分别对10例正常子宫内膜、9例EMs在位子宫内膜和11例EMs异位子宫内膜进行原代细胞培养、鉴定和细胞传代培养。
2、选取第三代正常子宫内膜细胞、EMs在位、异位内膜细胞，分别用2.5×10-4 mol·L浓度Rg3干预72小时后提取RNA，采用SuperArray基因芯片检测三组内膜细胞之间Rg3作用前后的血管生成相关的差异表达基因。
3、采用RT-PCR法验证基因芯片筛选出的血管生成相关的代表基因。
结果：
1.子宫内膜细胞培养结果正常子宫内膜培养的成功率是90％(9/10)、EMs在位子宫内膜培养的成功率是77.8％(7/9)、异位子宫内膜细胞培养的成功率为72.7％(8/11)。组织块法与酶消化法细胞培养成功率无明显差异(P＞0.05)。
2、基因芯片检测结果①人参皂甙Rg3干预前，EMs患者的在位、异位子宫内膜有37个基因同时比正常在位子宫内膜上调表达；②人参皂甙Rg3干预后EMs患者在位子宫内膜有41个基因同时下调表达，异位子宫内膜有32个基因同时下调表达。有代表性的是ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2、Notch4等。
3、RT-PCR实时验证上述代表基因结果人参皂甙Rg3作用前正常子宫内膜中ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2灰度值均低，EMs患者异位、在位子宫内膜中ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2灰度值增加，差异有显著性(P＜0.05)；经人参皂甙Rg3作用后EMs患者异位、在位子宫内膜中ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2灰度值明显降低，差异有显著性(P＜0.05)。由此看出人参皂甙Rg3可以抑制EMs患者异位、在位子宫内膜中ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2表达量。
4、将基因芯片检测结果与RT-PCR检测结果比较结果代表基因ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2特异性为100％。
结论：
1、通过采用胶原酶消化和组织块法，分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和基质细胞而没有细胞特征的改变，可为研究内异症的相关病理生理提供满意的体外细胞模型。
2、应用抗血管生成基因芯片筛选到了人参皂甙Rg3作用前后EMs异位内膜差异基因表达，主要与血管生成密切相关。人参皂甙Rg3可以使EMs促进血管生成基因下调、抑制血管生成基因上调。
3、人参皂甙Rg3通过抑制子宫内膜异位症病灶中ID1、NRP1、VEGFa、EFNB2等基因表达，从而减少VEGF的等促血管生成因子含量，影响细胞的生存、生长、迁徙和分化活动，使血管发生过程受阻，从而抑制子宫内膜异位症的发展。