中药枸骨叶抑制脂肪酶活性的药效物质基础研究

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近年来,随着人们生活水平的提高和生活方式的变化,脂质代谢紊乱类疾病肥胖症及代谢综合征等诸多常见重大疾病的患病率快速攀升。目前,临床主要应用Olistat作为脂肪酶抑制剂类治疗药物,但是研究表明Olistat具有胃肠道副作用以及潜在的肝毒性。相比之下,天然药物来源的脂肪酶抑制剂成分作用温和、毒副作用小、来源广泛而且价格相对低廉。   本课题组在前期研究中证实枸骨叶提取物能有效调节高脂大鼠脂质代谢。本论文在此基础上,以中药枸骨叶为研究对象,以脂肪酶为作用靶点,通过建立薄层生物自显影-脂肪酶抑制剂筛选方法,对枸骨叶进行提取工艺活性筛选及化学成分研究。   一、建立了脂肪酶抑制剂-薄层色谱-生物自显影方法。针对反应体系,对各项试验参数(包括测定波长、薄层板种类、反应物浓度、反应时间、显色时间等)进行考察,此外进行了系统的方法学考察,结果显示该筛选方法的灵敏度高,精密度、准确度、重复性、稳定性均良好,同时,本文还将测定结果与传统p-NPP法测定结果进行了相关性分析,相关系数r>0.9,表明两种方法的测定结果具有良好的相关性,综上所述,表明该模型适用于对具有抑制脂肪酶活性的活性筛选及评价。   二、采用脂肪酶抑制剂筛选模型,以总浸膏得率以及RLIC值为评价指标对枸骨叶抑制脂肪酶活性的提取工艺进行优化,确定以75%乙醇为提取溶剂,按料液比1∶20(m/v),水浴温度80℃为进行提取,提取2.5h为最佳提取工艺。   三、应用脂肪酶抑制剂筛选模型,对枸骨叶提取物进行活性筛选,根据活性筛选结果进行导向分离,活性筛选结果显示正丁醇部位为主要活性部位,通过传统柱色谱以及制备液相色谱等分离方法从该部位共分离得到10个化合物,包括5个三萜类化合物,4个黄酮类化合物以及1个脑苷脂类化合物。其中首次从冬青属植物中分离得到1个脑苷脂类化合物,首次从枸骨叶植物中分离得到得2个黄酮苷类化合物。   四、本文尝试将薄层色谱-EFISI-MS联用,并成功应用于荷叶中具有脂肪酶抑制活性的化学成分的研究,推断出5个活性成分结构;并初步应用于枸骨叶中活性成分的测定。
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