目的： 通过亚细胞、器官和整体动物三种水平的代谢实验，研究了一种新的抗真菌感染药利福布汀(Rifabutin，RBT)自身代谢、RBT被连续给药后对肝细胞色素P450酶系的影响、P-gp糖蛋白对RBT的药泵作用以及RBT的代谢途径与代谢产物，探讨了与RBT相关的药物相互作用机制，为临床的合理用药提供有益的指导。本研究目的归为以下4点： (1)RBT是否存在显著的自身诱导，即连续服用RBT一段时间之后是否加快了自身的代谢，如果存在并探询自身诱导的原因。 (2)RBT在肝脏器官水平上是否依然存在显著的自身诱导?是否是P-gp糖蛋白的底物? (3)RBT对大鼠的总CYP450以及各个主要亚酶活性水平的影响以及对大鼠胆碱酯酶活性的影响。 (4)RBT在大鼠肝脏的主要代谢产物以及它的代谢途径。 材料与方法： (1)Wistar大鼠(230g～250g，♂)12只，随机分为两组：RBT连续口服给药组(300mg·kg-1·day-1×7day，相当于临床治疗剂量)和空白对照组(等量的生理盐水替代)，每组6只。于实验第八天给予单剂量RBT300mg·kg-1后，按时间点取大鼠颈静脉血，HPLC测定血药浓度并绘制药时曲线。 (2)Wistar大鼠(230g～250g，♂)18只，随机分为三组：空白对照组、RBT诱导组(300mg·kg-1·day-1×7day)及Vcr组(加入P-gp转运体的特异性抑制剂verapamil)，每组6只。进行大鼠原位肝脏RBT灌流，测定各时间点RBT剩余量并绘制药时曲线。 (3)Wistar大鼠(230g～250g，♂)12只，RBT连续口服给药组(300mg·kg-1·day-1×7day)和空白对照组(等量的生理盐水替代)，每组6只。 实验第八天，每只大鼠取全血1ml备用，测血清中胆碱酯酶水平，用于评价RBT对大鼠胆碱酯酶的影响；取每只大鼠肝脏2g，匀浆，4℃超速离心，制备大鼠肝微粒体，用Lowry法测蛋白浓度及Omura法测定总体CYP450水平，储存备用。分别用两组微粒体体外温孵4种探针药物：Dextromethorphan(DEX)、Phenacetin(PHE)、Tolbutamide(TOL)和Chlorzoxazone(CHOL)，并用HPLC检测相应代谢物Dextrorphan(DM)、3-methoxymorphian(3-MM)、Acetaminophen (ACE)、4-hydroxy-tolbutamide(4-OH-TOL)和6-hydroxychlorzoxazone (6-OH-CHOL)的浓度，通过比较两组的特异性代谢物的生成速率差异分别用于评价RBT对大鼠CYP2D6、CYP3A2、CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1各亚酶的影响。 (4)Wistar大鼠(230g～250g，♂)一只，取其肝脏组织全部匀浆，匀浆液平均分成两份：一份为空白，先加入足量的甲醇沉淀蛋白后加入一定量的RBT；另一份匀浆液中加入同样量的RBT， 37℃温孵5小时，反应之后加入足量的甲醇沉淀蛋白。两份反应液离心、取上清、旋转蒸发、流动相溶解，HPLC分析检测。通过比较两个色谱图的差异来鉴定RBT的代谢物峰，LC-MS鉴定大鼠RBT主要代谢物。 为了解大鼠RBT的主要代谢途径，取空白微粒体做RBT体外温孵实验：blank组(用加热的方法使其生物活性完全丧失的微粒体蛋白)，control组(不加入任何其他抑制剂的活性微粒体蛋白)，特异性抑制剂组(加一定浓度的CYP450亚酶或胆碱酯酶特异性抑制剂的活性微粒体蛋白)。通过比较不同抑制剂对RBT的代谢速率影响来确定RBT的代谢酶。 结果： (1)连续给药组的RBT药物的t1/2发生显著改变，为空白对照组的71.08％。说明RBT具有明显的自身诱导作用，导致自身代谢明显加快。 (2)在Ver组和RBT连续给药组的器官灌流代谢实验中，结果显示为RBT的t1/2和AUC均发生了显著改变，t1/2分别为空白组的47.55％和12.74％；AUC. 分别为空白的58.41％和36.59％。说明摒除其他影响仅肝脏器官代谢也导致自身代谢明显加快。 (3)RBT连续给药组的总体P450水平是空白组的410.0％，RBT主要提高了CYP3A和CYP2D水平，分别提升为空白组的184.0％及155.7％；此外RBT组还提高胆碱酯酶的活性为空白的167.86％。 (4)RBT在大鼠的主要肝脏代谢产物是25-OH-RBT，RBT在肝脏的主要代谢酶是胆碱酯酶， 　　结论：(1)连续服用RBT之后，产生显著的自身诱导效应，即RBT自身代谢速率加快。提示长期服用RBT后，继续服用RBT则有必要考虑增加RBT药量以增加疗效。 (2)肝脏灌流中，Ver组代谢参数的改变提示RBT是P-gp糖蛋白的底物，当P-gp抑制剂或者诱导剂和RBT合用之后，RBT的血药浓度可能因此而改变；RBT连续给药组代谢参数的改变提示肝脏器官水平上仍然存在RBT的代谢自身诱导效应。 (3)RBT显著增加了大鼠的总体P450水平，并主要以CYP3A和CYP2D改变为主。提示如果RBT与某些CYP3A或者CYP2D的底物药合用之后，可能产生药物药物相互作用，引起合用药物的血药浓度的降低。RBT也显著增加了胆碱酯酶活性，若RBT和某些胆碱酯酶的底物合用之后，合用药物的血药浓度也因此降低从而降低药效。 (4)RBT在大鼠肝脏中的主要代谢产物和人类一致，故代谢途径应当和人类之间具有一致性；胆碱酯酶是RBT的主要代谢酶，RBT合用临床中的各种胆碱酯酶抑制剂之后，必将引起RBT血药浓度的增加进而导致药物毒性，如果合用胆碱酯酶诱导剂则会引起RBT血药浓度的降低从而降低疗效。