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鱼类疱疹病毒(Fish herpesvirus)是一类引起鱼类及其它水生动物致死性和流行性病害的病原。基于本实验室从患急性鳃出血病的鲫鱼体内分离了一株鲫疱疹病毒（crucian carp herpesvirus，CaHV），并对其基因组完成测序基础上，扩增了一个G蛋白偶联受体(G protein-coupled protein receptor，GPCR)类似物，对CaHV GPCR序列结构特征、C端突变体构建以及CaHV GPCR细胞定位等特征进行了相关研究，主要结果如下: 1.CaHV GPCR的克隆和特征分析。从患急性鳃出血病的鲫鱼中分离得到一株鲫疱疹病毒CaHV，该病毒具有疱疹病毒粒子的典型形态特征。从纯化的病毒中提取CaHV基因组DNA作为模板，克隆GPCR基因。CaHV GPCR基因全长1050 bp，其表达产物编码349个氨基酸。跨膜分析显示，CaHV GPCR具有典型七次跨膜结构域。对CaHVGPCR C端进行结构域分析显示含有一个赖氨酸残基(aa315，K)，一个推测的蛋白激酶C磷酸化位点(aa327-329，SSR)，以及一个推测的豆蔻酰化位点(aa335-340，GGGWTR)。氨基酸同源性搜索显示CaHV GPCR与CyHV-2 GPCR有100％的同源性，与其它病毒以及宿主编码的GPCR同源性均较低。亚细胞定位显示CaHV GPCR在FHM细胞定位于细胞质中，主要在核侧聚集分布。进一步通过荧光标签抗体定位显示CaHVGPCR具有相似的细胞定位。 2.CaHV GPCR C端结构域对细胞定位影响。基于对CaHV GPCR C端结构域进行分析，进一步通过截短、缺失以及替换等突变方法以分析C端结构域对CaHV GPCR亚细胞定位影响。荧光观察结果显示:CaHV GPCR C端赖氨酸残基(K-315)对于CaHVGPCR的细胞定位非常重要。氨基酸区域315-329(aa315-329，包括K和SSR)影响了CaHV GPCR在核侧分布。氨基酸结构域K和GGGWTR(aa315和aa335-340)共同影响了CaHV GPCR在核侧聚集分布。进一步检测与宿主细胞器共定位结果显示CaHV GPCR与高尔基体存在共定位，而不与内质网和线粒体共定位。分析C端与高尔基体共定位的关键位点，结果显示C端K-315是CaHV GPCR与高尔基体共定位的关键位点。 3.CaHV GPCR与细胞内组份共定位分析。进一步通过共定位实验检测了CaHVGPCR与细胞内组份标记蛋白的共定位，其中包括膜上运输蛋白包膜窖蛋白CAV1、CTxB和网格蛋白Cla，以及细胞内体标记蛋白包括早期内体标记蛋白Rab5、晚期内体标记蛋白Rab7、循环内体标记蛋白Rab11以及溶酶体标记蛋白LAMP-1等。荧光观察结果表明CaHV GPCR能够与包膜窖蛋白CAV1以及CTxB共定位，不与网格蛋白Cla共定位。同时与内体标记蛋白Rab5、Rab7、Rab11以及溶酶体标记蛋白LAMP-1均存在明显的共定位。为了检测溶酶体对于CaHV GPCR的作用，通过抑制剂氯喹(CQ)抑制其活性进行检测。荧光观察显示在FHM细胞CQ处理后能够显著增强CaHV GPCR的荧光聚集。Western blotting结果显示CQ处理上调了CaHV GPCR的蛋白表达水平。进一步检测了与溶酶体共定位的关键位点，结果显示其C端K-315能够影响CaHVGPCR与溶酶体的共定位。以上结果表明细胞组份蛋白与水生疱疹病毒GPCR存在潜在的相互作用，为进一步研究鲫疱疹病毒与宿主细胞的相互作用以及病毒在细胞内的侵染途径提供一些参考。