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第一部分神经肽Y受体2(NPY2R)高通量药物筛选模型的建立
NPY2R与多种行为和疾病相关，如食欲与进食，水分及钠离子的吸收，癫痫病，血管生成，肿瘤及癌症的发生，周围血管疾病，伤口愈合，抑郁症，酒精，尼古丁及咖啡因成瘾等等。本实验的目标是通过荧光检测胞内钙浓度的方法，建立基于Gα15的人NPY2R高通量药物筛选模型，并将其应用于高通量筛选平台中，筛选其特异性的激动剂/拮抗剂。
本研究通过分子克隆技术，构建了NPY2R表达质粒(hNPY2R-pcDNA3.1+)。利用脂质体将NPY2R质粒(hNPY2R-pcDNA3.1+)分别稳定转染HEK293/Gα15和HEK293/Gα16(本实验室现有)。通过抗生素G418筛选得到若干克隆团。利用已知的NPY2R特异性激动剂NPY(24-36)，通过荧光钙流检测方法挑选克隆。挑选对于此激动剂的刺激有明显钙信号变化且性噪比高的克隆作为进一步实验用细胞株。通过检测NPY2R细胞株对于这两种已知激动剂(PYY和NPY(24-36)和一种抑制剂(BIIE0246)的刺激实验验证细胞株表达NPY2R的功能性。结合荧光钙信号的分析，优化了筛选条件，结果表明：2.5mM probenecid，长的孵育时间，小于1.2％的DMSO浓度是最优条件。最终成功建立了一个NPY2R筛选系统和筛选方法，系统Z因子为0.68.证明此细胞模型稳定可靠，适用于NPY2R激动剂/拮抗剂的高通量筛选.然后以本实验室已有的天然产物库为基础，我们利用此细胞模型筛选了18种中草药，264个分离组分(Fraction)。筛选得到了三个活性成分，虽然活性成份与受体的作用机理还需进一步研究，但是证明了筛选方法的可行性。
第二部分瞬时受体通道V6(TRPV6)高通量药物筛选模型的建立
TRPV6是细胞膜上的选择性钙通道，在维持机体的钙平衡以及肿瘤的形成和转移中起重要作用.TRPV6特异性抑制剂能有效控制前列腺癌，乳腺癌等多种肿瘤细胞的生长。所以建立TRPV6抑制剂的高通量筛选模型成为疾病研究的需要，且TRPV6特异性抑制剂的发现会给医学界带来新的希望.本实验的目标是通过荧光检测细胞内钙浓度的方法，建立人TRPV6抑制剂的高通量药物筛选模型.
本研究通过分子克隆技术，构建了TRPV6表达质粒(hTRPV6-pcDNA3.1/hygro(+))。将TRPV6质粒(hTRPV6-pcDNA3.1/hygro(+))稳定转染HEK293，通过抗生素hygromycin筛选得到若干克隆团。利用TRPV6的组成型活性和钙离子选择通过性，通过荧光钙流检测方法挑选克隆。挑选对于钙离子刺激有明显钙信号变化的克隆。保留其中性噪比高的克隆作为进一步实验用细胞株。RT-PCR鉴定细胞株中TRPV6 mRNA的表达。Western blot验证细胞株中TRPV6蛋白的表达。镧系元素离子La3+和Cd2+是已知的TRPV6离子通道抑制剂。通过荧光钙流检测技术，分别检测TRPV6细胞株对于这两个离子刺激的反应验证细胞株表达TRPV6离子通道的功能性。数据表明：La3+和Cd2+作用于TRPV6的IC50与文献报道相符。最终成功的建立了一个新的TRPV6抑制剂的筛选系统和筛选方法，系统Z因子为0.71.证明此细胞模型稳定可靠，适用于TRPV6抑制剂的高通量筛选.