【摘 要】
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为了探讨微重力对小鼠卵母细胞减数分裂不同时期的影响及其分子机制,采用了转臂式生物反应器(RWVB)产生的模拟微重力环境对小鼠卵母细胞进行体外培养,以平面培养为对照,研究小鼠
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为了探讨微重力对小鼠卵母细胞减数分裂不同时期的影响及其分子机制,采用了转臂式生物反应器(RWVB)产生的模拟微重力环境对小鼠卵母细胞进行体外培养,以平面培养为对照,研究小鼠卵母细胞减数分裂机制。 小鼠卵母细胞在不同的重力条件下进行体外成熟培养,以第一极体排出为体外发育成熟的标准。结果表明:模拟微重力下体外培养16h的小鼠卵母细胞成熟率显著低于1G重力条件下的成熟率。模拟微重力下培养的卵母细胞存在多种形态,如正常排出第一极体、胞质中形成突起、似GVBD、变形。 通过免疫化学荧光法,研究定位两种重力条件对体外培养的小鼠卵母细胞的减数分裂器结构的影响。结果显示:平面培养的卵母细胞在各个时期都能形成结构完整的减数分裂器。模拟微重力培养下,大多数卵母细胞不能形成结构完整的纺锤体,并随培养时间的增加影响加剧。模拟微重力可能影响卵母细胞的微管组装系统,促进微管不稳定因子的释放,使微管系统紊乱造成解聚,微管无法聚集形成完整纺锤体,导致同源染色体分离失败。 采用小鼠基因芯片对不同重力条件下培养的卵母细胞进行全基因组扫描,以找出不同重力下卵母细胞基因表达的差异,探讨重力影响卵母细胞减数分裂的分子机制。结果显示在模拟微重力下影响卵母细胞的代谢、MAPK通路和微管的解聚系统。 为阐明CCDC69基因在小鼠卵母细胞的减数分裂过程中的功能,首次成功构建了pEGFP-CCDC69载体,体外转录出带有GFP-CCDC69的mRNA,将其显微注射到小鼠卵母细胞中,表达出带有GFP标签的蛋白,来揭示CCDC69在小鼠卵母细胞中的表达、亚细胞定位、迁移规律等功能作用,初步认定融合蛋白GFP-CCDC69在胞质内表达。
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