狂犬病是人类最古老、死亡率几乎100％的人兽共患传染病，其病原是狂犬病毒。该病毒属于弹状病毒科狂犬病毒属，为单股负链RNA。病毒基因组结构为3Leader-N-P-M-G-L-5，在G-L之间存在无功能的假基因(ψ)。P蛋白与L蛋白结合，构成病毒RNA复制的RNA聚合酶，此外，在病毒装配中起关键作用。 本实验第一部分主要是对狂犬病毒P蛋白进行了克隆和原核表达。为了制备足够量的目的蛋白用作免疫原，通过PCR和双酶切从pcDNA3.1-P重组质粒获得P基因的ORF框，并将它连接到表达载体pET32a(+)，构建了融合型原核表达质粒pET32a(+)-P。经转化和诱导，P蛋白在大肠杆菌E. coli BL21(DE3)中获得高效表达。SDS-PAGE、切胶、纯化蛋白、免疫新西兰大白兔。首免以弗氏完全佐剂与蛋白等量乳化，3mL/只(约100～400μg蛋白含量)。二免、三免以弗氏不完全佐剂与蛋白等量乳化免疫。三免后采血分离血清，以琼脂扩散试验及Western-blotting试验进行鉴定，获得了狂犬病毒P蛋白的高免血清。 第二部分内容是以表达的狂犬病毒P蛋白作为免疫原制备单克隆抗体。将纯化的P蛋白与佛氏完全佐剂等比例混合、乳化后首免6～8周龄的BALB/c雌性小鼠，每间隔半个月分别将蛋白与佛氏不完全佐剂1：1乳化进行二免和三免。三免后2周用抗原原液加强免疫一次。3d后摘取脾脏，制备脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。以间接免疫荧光法(IFA)检测杂交瘤细胞上清，初步筛到一个阳性孔。将获得的阳性细胞经有限稀释法进行多次亚克隆培养后，筛选出稳定分泌特异性单抗的细胞株。 本研究成功表达了狂犬病毒P蛋白，制备了兔的高免血清，并建立了用于筛选杂交瘤细胞的间接免疫荧光检测体系，为进一步开展狂犬病毒P蛋白单克隆抗体的研究研究奠定了基础。