【摘 要】
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为了解PRRSV JXA1株致弱的分子学基础,本试验将PRRSV JXA1-86株在Marc-145细胞上连续传10代,得到JXA1-96株。根据GenBank上发表的PRRSV基因序列设计并合成9对扩增区域相互重
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为了解PRRSV JXA1株致弱的分子学基础,本试验将PRRSV JXA1-86株在Marc-145细胞上连续传10代,得到JXA1-96株。根据GenBank上发表的PRRSV基因序列设计并合成9对扩增区域相互重叠的特异性引物,扩增两毒株的全基因组片段,并将其分别成功克隆到pEasy-T1载体后进行序列测定,用DNA Star软件拼接测序结果,得到JXA1-86与JXA1-96株的全基因组序列。将JXA1株与JXA1-86株序列比对分析,发现Nsp5、Nsp6、Nsp8、Nsp12、M、 N蛋白编码的氨基酸未发生变化,表明JXA1株毒力的降低可能与这些蛋白无关;将JXA1株和JXA1-86株与其他2对PRRSV原始毒株/弱毒疫苗株进行基因序列比较分析,发现这3对毒株中结构蛋白的氨基酸突变率更高一些,表明毒力的改变与结构蛋白的改变关系更大一些；将各代次PRRSV序列比对分析,发现在第70代到第86代序列之间,ORF1a中A928V, I1155M, E1629D(前两个突变位于Nsp2中,第三个突变位于Nsp3中),GP2中I11sV,GP3中H79N,GP4中1124V,GP5中K59N发生了改变,说明其毒力的减弱可能与以上几处变异有关。利用不同生物信息学软件对JXA1株与JXA1-86株的Nsp2, Nsp3, GP2, GP3, GP4和GP5蛋白进行分析,探究突变对蛋白的影响,推测其致弱的可能原因,为研发高致病性PRRSV弱毒疫苗提供一定的理论基础。
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