目的:　　皮肤损伤后胶原蛋白等细胞外基质的异常沉积,可形成病理性瘢痕,不仅会破坏人的体表完美,严重者往往导致功能障碍。对病理性瘢痕的防治一直是临床研究的重要课题。瘢痕成纤维细胞是瘢痕形成过程中的关键效应细胞。而转移生长因子β(TGF-β)是目前已知的与瘢痕过度形成关系最为密切的细胞因子。在体外实验中,TGF-β可增加胶原、纤连蛋白、透明质酸等的合成。目前,关于病理性瘢痕的基因治疗的研究己经开展了很多。随着RNA干扰(RNA interference, RNAi)现象的被发现,为瘢痕增生的基因治疗带来了新方法。RNAi是指外源或内源双链触发靶基因转录的同源序列 mRNA特异地降解,从而产生相应功能缺失,这个过程属于转录后基因沉默(PTGS)。因其具有特异性、高效性、持久性而得到应用。而用RNAi技术治疗瘢痕增生的研究,国内外报道的很少。我们针对 TGF-β II型受体基因的不同部位构建不同 TGF-β RIIshRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达质粒载体,在转录后水平抑制TGF-βRII的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆,为临床增生性瘢痕的防治提供科学的实验依据。　　方法:　　根据RNA干扰原则,DNA重组技术将针对人TGF-βRII基因不同部位所设计的3对shRNA序列,退火形成双链克隆连接到真核表达质粒pSilencer3.1-H1 neo vector中,构建TGF-β RII shRNA表达载体pSilencer3.1-H1-TGF-β RII shRNA1、2、3及阴性对照pSilencer-mismatch shRNA,并进行酶切鉴定和测序。体外原代培养增生性瘢痕成纤维细胞(靶细胞)。脂质体介导转染人原代增生性瘢痕成纤维细胞,经G418筛选应用RT-PCR方法,检测了TGF-βII水平的变化,获得TGF-β RII表达的高效稳定转染细胞克隆。采用MTT法检测高效稳转体外培养增生性瘢痕成纤维细胞接种24、48和96h后其增殖的变化。　　结果:　　3个TGF-βRIIshRNA表达载体pSilencer3.1-H1-TGF-βRII shRNA1、2、3及阴性对照pSilencer-mismatch shRNA经序列分析证明基因插入正确。RT-PCR证实:3种 shRNA重组质粒可降低细胞内 TGF-β RII mRNA丰度,其中以pSilencer?3.1-H1-TGF-β RII shRNA2最为明显。选择采用 pSilencer3.1-H1-TGF-βRII shRNA2稳定转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞生长24h、48 h、96 h后,可抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。　　结论:　　成功构建了TGF-β RIIshRNA表达载体 pSilencer3.1-H1-TGF-βRII shRNA1、2、3并筛选出特异而高效地阻断 TGF-β RII表达的克隆。采用pSilencer3.1-H1-TGF-βRII shRNA2稳定转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,可抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。