烟雾冷凝萃取物和尼古丁对人牙龈成纤维细胞在钛片表面生长状态及细胞因子表达的影响

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目的:  种植体颈部形成严密的软组织封闭有重要的影响,健康的牙龈组织是形成种植体颈部软组织封闭的基础。为了研究吸烟对种植体颈部软组织封闭的影响,本研究通过观察烟雾冷凝提取液(CSC)和尼古丁对人牙龈成纤维细胞在钛片表面生长情况的影响并检测其IL-6、IL-8以及纤维结合蛋白(FN)的表达,来探讨烟草对种植体根界面破坏的理论机制。  方法:  采用组织块法进行人牙龈成纤维细胞(HGFs)的原代培养,将厚度1mm、直径10mm的钛片用金相砂纸逐级打磨,HGFs接种到打磨好的钛片上, MTT法测定细胞在钛片表面贴附数量,24小时后,荧光倒置显微镜、激光扫描共聚焦显微镜观察拍片,分析钛片表面细胞形态、铺展的变化。RT-PCR检测FN的mRNA水平。PCR检测炎性因子IL-6以及IL-8的表达量。ELISA法检测CSC和尼古丁在钛片上对HGFs合成Fn的影响  结果:  1.CSC在浓度为250μg/ml时会导致细胞死亡,而尼古丁只需要16μg/ml即可,但 CSC在浓度为50μg/ml时会适度诱导细胞活力。  2.CSC在浓度为50μg/ml和尼古丁浓度为3.21μg/ml时都能刺激细胞迁移, CSC在150μg/ml时抑制细胞迁移,但相当浓度的尼古丁(换算成相同浓度的9.6μg/ml)没有此效果。CSC相比较尼古丁而言,更加能够抑制α-平滑肌动蛋白的产生。  3. CSC可以抑制细胞迁移和存活,并在高浓度时抑制这些细胞的应答,此外CSC可能会干扰成肌纤维母细胞的分化,CSC可显著改变牙龈间叶细胞活力,迁移和成纤维细胞的分化,而去除刺激因素时,细胞在培养皿表现与正常体内相同。  4. CSC及尼古丁均可抑制牙龈成纤维细胞在钛片表面的粘附,且随着CSC及尼古丁浓度逐渐升高,细胞在钛片表面粘附的数目逐渐减少。  5.在CSC和尼古丁的刺激下,抑制HGFs增殖及合成Fn,并且牙龈成纤维细胞对炎性因子(IL-6、IL-8)的表达量明显増加。  结论:  尼古丁能抑制人HGFs的增殖。尼古丁和CSC抑制HGFs合成Fn,随着两种刺激物浓度的增加,Fn合成量逐渐减少。由此说明一定量浓度的尼古丁影响HGFs的生长,并不易附着于根面,加重种植体周围炎,进一步影响牙周新附着的形成。
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