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c-myc是恶性肿瘤中失常频率最高的癌基因之一,许多恶性肿瘤的发生、演变与c-myc的异常高表达有关.在人急性早幼粒白血病HL-60细胞中c-myc异常高表达是恶性肿瘤细胞维持生长的重要原因,与临床急性早幼粒白血病的发展及预后关系密切.c-myc基因表达异常可以阻断体外造血细胞进行分化的过程,实验证实阻断细胞分化功能的位点与c-myc蛋白恶性转化的作用位点几乎是一样的.细胞体外进行分化时,c-myc基因表达明显下降,高表达的c-myc基因则干扰细胞分化过程.反义核酸技术为抑制c-myc的高表达提供一种良好的途径.它比基因敲除(gene knockout)、基因替换(gene replacement)等方法更简单易行,有利于临床应用.通过腺病毒载体构建重组病毒,具有靶细胞广泛;对增殖、静止期细胞都可转染;不会产生突变;外源基因装载量大等诸多优点.已经进入临床实验治疗.白血病细胞表面缺少腺病毒纤毛蛋白受体,限制了其转导效率.近年通过对腺病毒表面纤毛蛋白的改造及辅助转导技术的使用,这一问题得到不断改进.使腺病毒载体在肿瘤的基因治疗的范围得到扩大.目的:通过多聚阳离子辅助重组Lac-Z腺病毒载体(Ad-LacZ)转染急性早幼粒HL-60细胞,尝试提高重组腺病毒载体对HL-60细胞的转染效率.利用重组反义c-myc腺病毒载体(Ad-Asc-myc)转染HL-60细胞诱导其分化,研究其分化过程的分子机制.探讨反义c-myc腺病毒载体用于急性白血病基因治疗中的可能性.方法:将多聚阳离子与Ad-LacZ混合转染HL-60细胞,通过X-gal染色观察LacZ基因表达,得出转染效率.Ad-Asc-myc与多聚阳离子混合转染HL-60细胞,利用RT-PCR及免疫细胞化学染色观察其对转染细胞c-myc转录及蛋白表达水平的影响.MTT、台盼蓝排斥试验检测Ad-Asc-myc对转染细胞的生长及活力的影响,Wrights染色观察细胞形态的变化.NBT、非特异酯酶染色了解细胞的分化功能变化,流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期分布、细胞分化抗原CD<,13>及CD<,33>的变化,免疫细胞化学染色观察分化、增殖相关基因PCNA、hTERT和c-fos的表达.结果:MOI:100, Ad-LacZ组转染效率:35.9﹪,Ad-LacZ+protamine sulfate:79.8﹪Ad-LacZ+polybrene:40.7﹪,多聚阳离子辅助可提高腺病毒对HL-60细胞的转染, protamine sulfate优于polybrene.Ad-Asc-myc降低了c-myc基因在转录及蛋白水平的表达.可以抑制HL-60细胞生长及活力.在细胞形态、白细胞分化抗原及功能上出现粒系分化特征.细胞周期分析:Ad-Asc-myc转染组出现G<,0>/G<,1>阻滞,S期细胞下降.分化增殖相关基因PCNA、hTERT表达降低,c-fos基因表达增强.结论:Ad-Asc-myc在多聚阳离子辅助下能有效转染人急性早幼粒白血病HL-60细胞.转染后能降低HL-60细胞c-myc的表达.抑制HL-60细胞的生长,使细胞阻滞于G<,0>/G<,1>期,在细胞形态及生物功能上诱导HL-60细胞分化.还可以调节与增殖分化相关基因PCNA、hTERT及c-fos的表达.