【摘 要】
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由本实验室杨蓓同学通过体内重组并测吸收和荧光光谱发现鱼腥藻(Anabaena sp. PCC7120)体内别藻蓝蛋白?亚基与PCB结合后生成PCB-ApcD,其光谱在提纯前后发生变化,提纯前、后最
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由本实验室杨蓓同学通过体内重组并测吸收和荧光光谱发现鱼腥藻(Anabaena sp. PCC7120)体内别藻蓝蛋白?亚基与PCB结合后生成PCB-ApcD,其光谱在提纯前后发生变化,提纯前、后最大吸收波长分别为605nm左右和650nm左右,最大荧光发射峰分别为633nm左右和665nm左右。 为了对上述现象进行研究,构建了ApcD的突变体ApcD(W59Q),对其进行体内重组并测光谱后发现,突变体ApcD(W59Q)的光谱在提纯后不发生变化,故认为该氨基酸在提纯过程中的氧化可能是导致PCB-ApcD的光谱在提纯后发生变化的原因之一。 基于鱼腥藻Anabaena sp. PCC7120和集胞藻Synechocystis sp. strain PCC6803高的亲源性,以Synechocystis sp. strain PCC6803别藻蓝蛋白?亚基作为模板,对该亚基的第116位酪氨酸(Tyr)进行了定点突变和体内重组的光谱分析,突变体ApcD(Y116S)与野生型ApcD光谱性质相同,光谱在提纯后不发生变化。 由本实验室王建林同学对Synechocystis sp.strain PCC6803的88位Y(酪氨酸)突变(Y88I)的体内重组研究结果可知,该氨基酸残基的突变使其荧光和吸收光谱的波峰位置在提纯后发生变化。因此利用同源重组的方法将apcD(Y88I)与本实验邱阳同学构建的apcD缺失藻进行自然转化,使得突变后的apcD片段回复到6803藻体内,以研究该apcD基因的突变对蓝藻生长及调控的影响。 通过同源性分析,发现一种可能催化Gloeobacter violaceus PCC7601中CpeA和CpeB与PCB连接的来自Gloeobacter violaceus PCC7421的基因glr1191,用分子克隆方法成功克隆该基因。
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