【摘 要】
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百合花姿雅致、娟秀,花茎挺拔,是点缀庭园、盆栽与切花的名贵花卉,深受世界各国人民的喜爱。近年来,百合的品质改良围绕花色、花型、花香等观赏性状以及百合抗衰老、抗病研究
【出 处】
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西北农林科技大学 西北农林科技大学
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百合花姿雅致、娟秀,花茎挺拔,是点缀庭园、盆栽与切花的名贵花卉,深受世界各国人民的喜爱。近年来,百合的品质改良围绕花色、花型、花香等观赏性状以及百合抗衰老、抗病研究等方面进行了许多研究,取得了可喜的成果。如何将人们希望的性状通过基因工程的手段转入百合,以获得更多的稳定遗传的新、奇、特的百合新品种,是目前百合育种学家所面临的问题。本研究在前人从百合中克隆获得查尔酮合成酶基因(chs)启动子的基础上,对该启动子的功能进行了初步的分析,旨在获得百合花器官特异、高效表达的启动子,为载体构建提供有效的调控元件,为应用该花特异启动子调控外源基因在花中特异表达,培育花卉新品种,提高花卉观赏价值提供科学依据。本研究取得的主要结果如下:1、构建了植物表达载体以chsA-F和chsA-R为引物扩增pCHS模板,将启动子片段克隆到pGEM-T-easy载体上,获得重组质粒pCHS-T。用BamHⅠ和EcoRⅠ对双元表达载体pCAMBIA 1381和重组质粒pCHS-T进行双酶切,将启动子片段构建到pCAMBIA 1381中,用于驱动gus基因的表达,得到植物表达载体pCAM-CHS。用冻融法将该植物表达载体pCAM-CHS直接导入根癌农杆菌EHA105菌株中,通过农杆菌菌液PCR检测,表明该载体已成功导入农杆菌EHA105菌株中。2、转化拟南芥并进行了PCR检测通过花序浸润法(Floral Dip)转化拟南芥,经潮霉素抗性筛选,获得阳性植株43株,转化效率为2.5%~3%。随机选取9株提取DNA,用hyg基因、gus基因和chs启动子的3对引物进行了PCR检测,9株转基因植物的DNA都扩增出了hyg基因和chs启动子,7株扩增出了gus基因,未转化植株3个基因均未扩增出来。3、对转基因植株进行了GUS组织化学检测对转基因植株不同部位的组织进行GUS检测,经X-gluc染色显示,花序中有明显的蓝色,叶腋处有微量的蓝色,茎、根及荚果中都无蓝色出现。表明在转基因拟南芥的花中表现很强的GUS活性,茎、叶、根及荚果中无表达,叶腋处有微量表达,证明查尔酮合成酶基因启动子在转基因植株中能驱动外源基因的表达,具有明显的组织器官特异性。
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