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【目的】 通过使用DAPT抑制Notch信号通路,研究其对急性白血病患者的白血病干细胞分化的影响,进一步探讨Notch信号通路抑制剂DAPT对白血病干细胞的作用。 【方法】 1. 样本采集 选自广东医科大学附属医院(2017-04至2018-03)初诊白血病患者20例,分别取骨髓1-1.5mL后用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,采集后4小时内使用骨髓淋巴细胞分离液分离成单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)。 根 据 形 态 学 - 免 疫 学 - 细 胞 遗 传 学 - 分 子 生 物 学(Morphology-immnophenotype-cuyogenetics-molecular-biology,MICM)诊断分型对其分为11例急性淋巴细胞白血病(Acute B lymphocyte leukemia,ALL),9例急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)。 2. 细胞培养 分离出的MNCs接种于加入10%FBS的1640培养液的培养皿中培养,于37℃5%C02的培养箱中培养。实验组即加入DAPT以1umol/ml浓度处理细胞再培养,对照组组为加入DMSO以1umol/ml浓度处理细胞再培养。 3. 细胞形态学检测 DAPT处理5d后细胞使用PBS洗涤细胞三遍,甩片后行瑞氏-姬姆萨染色后在显微镜油镜下观察细胞形态变化。 4. 流式细胞术检测细胞表型 培养细胞在DAPT处理48h后收集起来,使用流式细胞术分别检测对照组及实验组中细胞CD34,CD34+CD38-,CD123,CD14的表达。 【结果】 1. DAPT对细胞形态的作用 经瑞特-姬姆萨染色显示,DAPT作用后的ALL细胞形状不规则,而且细胞膜出现芽状或棘刺状突起,并且破坏细胞增多。而DAPT作用后的AML细胞形态与其对照组无明显变化,从而推断Notch信号抑制剂DAPT促进ALL白血病干细胞分化,而无促进AML白血病干细胞分化的作用。 2. DAPT对细胞分化的作用 (1)经流式细胞术对细胞免疫表型的检测显示,AML中的实验组中CD34+、CD34+CD38-、CD123+细胞群百分比较对照组表达稍减少,差异无统计学意义(P>0.05);AML中实验组中CD14+细胞群百分比较对照组表达稍增多,但差异无统计学意义(P>0.05)。提示Notch信号抑制剂DAPT无促进AML白血病干细胞分化的作用。 (2)经流式细胞术对细胞免疫表型的检测显示,ALL中的实验组中CD34+、CD34+CD38-、CD123+细胞群百分比较对照组表达明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05),而CD14+细胞群百分比较对照组表达明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。提示Notch信号抑制剂DAPT能促进ALL的白血病干细胞分化同时可能抑制其增殖及促进其凋亡。 【结论】 Notch信号抑制剂DAPT促进ALL白血病干细胞分化,而不能促进AML白血病干细胞分化,Notch信号通路在ALL的白血病干细胞分化起到重要的作用。