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目的：研究不同年龄小鼠肝脏内Mac-1阴性和阳性自然杀伤细胞数量分布特征及功能的变化，以及参与抗肿瘤免疫反应的状况，评估Mac-1阴性NK细胞的功能特点，为Mac-1阴性NK细胞抗大肠癌肝转移的后续实验提供实验和理论依据。
方法：应用2周龄(幼年)和8周龄(成年)的C57BL/6小鼠。1、体外法：(1)分离提取淋巴细胞：用MACS(Magnetic cell sorting)系统分离Mac-1阳性和Mac-1阴性NK细胞并测定肝脏内淋巴细胞、NK细胞、Mac-1阳性和阴性NK细胞的百分比和细胞绝对值。(2)NK细胞杀伤活性测定：应用4小时51Cr法分别测定不同年龄小鼠肝脏内Mac-1阳性和阴性NK细胞对靶细胞的杀伤活性。2、体内法：(1)流式细胞分析：将小鼠进行瘤细胞接种后，用流式细胞仪测定肝脏内NK细胞Mac-1的表达水平。(2)用Annexin V-FITC和PI检测凋亡：小鼠进行瘤细胞接种后，分别提取和进行肝脏内Mac-1阳性和阴性NK细胞的凋亡分析。
结果：肝脏内淋巴细胞总数在幼年鼠和成年鼠之间通过体重校正后没有明显差异，分别为：幼年鼠0.27±0.08，成年鼠0.26±0.04，P=0.917，幼年小鼠略微多于成年小鼠。2周的幼年鼠的肝脏内NK细胞百分比(11.3％，SE=0.27)略高于8周成年小鼠(9.67％，SE=0.21)(P=0.077)，但差异并不显著。幼年小鼠肝脏内Mac-1(-)NK细胞占优势(73.2％)，而成年小鼠肝脏内Mac-1(+)NK细胞占优势(76.8％)。提纯的幼年小鼠肝内NK细胞杀伤活性显著高于成年小鼠(P<0.001)，Mac-1(-)NK细胞的细胞杀伤活性明显高于Mac-1(+)NK细胞(E：T12.5:1，54.3％vs28.93％)。通过尾静脉注入瘤细胞后，各年龄小鼠都表现出Mac-1(+)百分比率的下降，分别从23.2％到11.8％和从80.1％到47.8％，与之相对应的Mac-1(-)NK细胞的比率明显上升，Mac-1(+)NK细胞的数目明显减少。成年小鼠肝内Mac-1(+)NK细胞数由39.77×104下降到到10.29×104(P<0.01)而同时Mac-1(-)NK细胞数表现为上升的趋势。经过静脉注射瘤细胞8小时和16小时后，Mac-1(+)NK细胞凋亡明显(5.3％vs19.6％，荷瘤8小时后；10.3％vs65.2％，荷瘤16小时后)，对比Mac-1(-)NK细胞则变化不大。
结论：
1、幼年期和成年期小鼠肝脏内NK细胞比例保持恒定。幼年小鼠Mac-1阴性NK细胞占有明显优势地位，而成年小鼠Mac-1阳性NK细胞则占有明显优势。证明Mac-1(+)和(-)NK细胞在分布上存在差异。
2、幼年小鼠淋巴细胞杀伤活性要高于成年小鼠，提纯的幼年小鼠NK细胞杀伤活性要高于成年小鼠，Mac-1(-)NK细胞的细胞杀伤活性明显高于同时期Mac-1(+)NK细胞。Mac-1(+)和(-)NK细胞在功能上存在差异。
3、幼年小鼠和成年小鼠进行瘤细胞接种后，Mac-1(+)NK细胞数量明显下降，而同时Mac-1(-)NK细胞的百分比明显上升。产生这种现象的主要原因是Mac-1(+)NK细胞发生凋亡，而Mac-1(-)NK细胞受到的影响较小。
4、体内外实验证明幼年小鼠肝脏内占主要地位的Mac-1阴性NK细胞具有很强的杀伤活性。Mac-1阴性NK细胞不仅参与了天然免疫中的重要活动，而且较Mac-1阳性NK细胞表现出了更强的抵抗肿瘤的作用，受肿瘤细胞的影响也较小，本研究的结论尚未有报道，Mac-1(-)NK细胞可能是NK细胞抗肿瘤活动中发挥更重要作用的细胞亚型，用Mac-1划分NK细胞的成熟状况或功能类别是有待商榷。