【摘 要】
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该实验组在偶然的实验中发现蛇毒中具有促进细胞存活的物质,该课题进一步改进分离条件从中华眼镜蛇华南亚种纯化出蛇毒神经保护因子(CNPF),研究它对低钾引起的小脑颗粒神经元
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该实验组在偶然的实验中发现蛇毒中具有促进细胞存活的物质,该课题进一步改进分离条件从中华眼镜蛇华南亚种纯化出蛇毒神经保护因子(CNPF),研究它对低钾引起的小脑颗粒神经元凋亡具有抑制作用的量效曲线和时效曲线,探讨其神经元保护作用的信号传导通路,并测定其氨基酸序列.结论1.中华眼镜蛇华南亚种的粗蛇毒经过CM Sephadex C-50、DEAE Sephadex A-50和Sephadex G-50分离、纯化后得到1个能对抗低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡组分,并命名为蛇毒神经保护因子(CNPF),通过高效液相色谱得到纯度为93﹪,SDS-PAGE测得分子量为14.4KD.2.蛇毒神经保护因子能够剂量依赖性抑制低钾引起的小脑颗粒神经元凋亡,EC<,50>为251 ng/ml.CNPF没有经过ERK1/2通路和PI3K/Akt通路、cAMP/PKA通路、Ca<2+>通道和α非敏感性N受体抑制细胞凋亡,Western免疫印迹法测定ERK1/2和PI3K/Akt,进一步支持CNPF保护细胞的机制没有通过经典的神经营养因子信号传导通路.3.CNPF一级结构N-末段20个氨基酸与眼镜蛇毒的PLA<,2>相同,并且具有磷脂酶的活力,提示CNPF是具有PLA〈,2〉保守序列的古老蛋白进行产物.
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