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目的本实验通过SYBRgreenⅠ荧光定量RT-PCR方法和免疫组织化学方法检测正常和单眼形觉剥夺大鼠视皮层Neuritin mRNA和蛋白的动态表达,研究Neuritin与视觉经验和年龄的相关性,及形觉剥夺对其表达的影响,以期从分子水平探讨Neuritin与视觉发育的相关性,为弱视的发病机制提供理论依据。方法1.健康Wistar大鼠50只,雌雄不限,由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心（天津）提供,分为10组,每组5只,正常饲养,单眼形觉剥夺（MD）组于出生后第14天制作右眼形觉剥夺模型,分组情况:正常组分别为NP7、NP14、NP21、NP28、NP45和NP90组,MD组分别为MD21、MD28、MD45和MD90组。所有大鼠分别饲养至所需要的天数时麻醉、断头、取脑（MD组取左侧视皮层脑组织）、提取总RNA,总RNA质量和纯度的检测,逆转录为cDNA,半定量PCR反应,SYBRgreenⅠ荧光定量RT-PCR反应,反应结束后用计算机将样本与标准品对比,并结合内参照得到大鼠视皮层组织Neuritin mRNA的相对表达量。各组计量资料以均数±标准差（（?）±s）表示,采用SPSS16.0统计分析软件对mRNA相对表达量进行处理,相同时间段的两组间比较采用独立样本的t检验,发育不同时限多组间比较采用单因素方差分析。2.实验大鼠分组情况和单眼剥夺模型的制作同第一部分。大鼠分别饲养至所需要的天数时麻醉、灌注、固定、开颅、冠状切取后部脑组织,置于4%多聚甲醛固定液中24-48h后,常规石蜡包埋。行4μm冠状连续切片,行常规HE和免疫组织化学方法染色。显微镜下观察Neuritin蛋白在视皮层中的表达情况。Olympus显微摄像系统采集图片,采用图像分析软件进行累计光密度（IOD）值测定。对IOD值进行分析和比较,实验数据以（?）±s表示,采用SPSS16.0处理数据,MD组与正常组间采用成组设计的t检验,同组发育不同时限的IOD值采用单因素方差分析。结果1.（1）标准曲线结果:从溶解曲线图可知大鼠视皮层Neuritin和内参照GAPDH mRNA无论哪一种浓度的模板都能够得到单一的PCR扩增产物,无引物二聚体和发卡结构;扩增曲线和标准曲线图的线性关系良好,在该实验浓度范围内能够进行准确定量。（2）正常大鼠视皮层Neuritin mRNA表达:正常大鼠视皮层中Neuritin mRNA的相对表达量随年龄增长呈发育性变化,即睁眼前视皮层中就已存在,但含量很少,其相对表达值P7为0.152±0.011,随后表达逐渐上升,P14天为0.234±0.052,P21天为0.527±0.047,在P28天表达量达峰值,为0.846±0.067,后略有下降,P45天为0.445±0.020,至成年后维持于一定水平,其相对值为0.410±0.017,单因素方差分析各年龄段间Neuritin mRNA的相对表达差异具有显著性（F=177.52,P＜0.01）。（3） MD组大鼠视皮层NeuritinmRNA表达:MD21相对表达值为0.412±0.015,MD28相对值为0.501±0.019,MD45相对值为0.381±0.030,MD90相对值为0.384±0.015,单因素方差分析各年龄段间Neuritin mRNA的相对表达量差异具有显著性（F=36.93,P＜0.01）。各个时间段MD组与正常组比较其相对表达量均有明显减少,差异有显著性(t21=5.262,P＜0.01、t28=11.223,P＜0.00、t45=3.970,P＜0.01、t90=2.492,P＜0.05)。2.（1）HE染色结果:正常发育组大鼠视皮层的神经元分布呈层状,从皮质浅层至深层依次分为分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层和多形细胞层,各层神经元排列整齐。MD组大鼠视皮层未见明显异常。（2）不同发育时限大鼠视皮层Neuritin的表达:光镜下可见Neuritin的阳性反应产物呈棕黄色点状或颗粒状,主要位于神经元细胞膜,神经元胞体、胞核不被标记。在视皮层各层均可见Neuritin阳性颗粒。比较不同发育时限的正常组Neuritin IOD值,可以看出正常发育组Neuritin的阳性表达随年龄呈发育性变化,P7 Neuritin蛋白表达量很少,其IOD值为6.48±0.62,睁眼后表达量明显增加P14天时其IOD值为14.56±2.37,P21天有明显升高,达到23.36±4.28,P28天时达高峰,为67.94±5.98,随后开始下降,P45天时持续在较高水平,其IOD值为26.85±2.33。单因素方差分析各年龄段间Neuritin阳性表达产物差异具有显著性（P＜0.05）。MD组Neuritin阳性表达产物明显减少,表现为密度减低及数量减少。其IOD值在P21天为18.17±1.42（t=2.571,P＜0.05）,P28为30.92±2.17（t=6.802,P＜0.01）,P45为19.33±2.08（t=5.379,P＜0.01）。结论1.不同发育时限的大鼠视皮层组织中均有Neuritin mRNA表达,其表达的蛋白在视皮层各层均有表达,且两者呈同步性。推测Neuritin基因参与了视觉系统发育,可能对视皮层神经元的发育和成熟起着重要作用。2.Neuritin mRNA和蛋白的表达受年龄因素的影响,其表达变化规律与视觉发育关键期的起始和终止时间相符合。3.视觉经验对于发育期视皮层Neuritin mRNA和蛋白的表达有调控作用,异常视觉经验影响其表达,表明Neuritin的表达随视觉发育呈现活动依赖性表达,从分子水平为弱视发病机制的研究提供了理论依据。