【摘 要】
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生物活性多糖,被作为药物制剂的研究已经渐渐步入正轨,其中关于改造其结构及理化性质,从而改善其生物活性的技术工艺已经初具规模。近年来,本实验室在自主发酵制备的Rhizobium sp
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生物活性多糖,被作为药物制剂的研究已经渐渐步入正轨,其中关于改造其结构及理化性质,从而改善其生物活性的技术工艺已经初具规模。近年来,本实验室在自主发酵制备的Rhizobium sp.N613胞外多糖(REPS)的基础上,对其进行降解,制得低分子量活性多糖(LREPS)。本论文主要的研究内容为:以低分子量活性多糖LREPS为原料,对其进行羧甲基化修饰及纳米硒化修饰。 制备羧甲基化LREPS(CM-LREPS)时,以一氯乙酸为修饰剂,在碱性条件下修饰LREPS,以正交实验优化其制备条件,同时得到一系列不同取代度梯度的修饰产物;制备过程中考察一氯乙酸与多糖用量比,氢氧化钠与多糖用量比,醚化的温度及时间对产物羧甲基化LREPS取代度(DS)的影响,根据抗肿瘤活性选出最优取代度的CM-LREPS,以红外光谱仪分析CM-LREPS结构,并测定其水溶性及黏度。结果显示一氯乙酸与多糖用量比对CM-LREPS取代度的影响最大,其次是反应温度,氢氧化钠与多糖用量比再次之,反应时间的影响最小。CM-LREPS体内外抗肿瘤活性检测结果表明:CM-LREPS对鼠肝癌H22细胞及人肝癌HepG2细胞均有一定的体外抑制作用;而动物实验中CM-LREPS对鼠肝癌H22有体内抑制作用且能显著提高小鼠免疫器官指数,其中抑制率最高的CM-LREPS取代度为0.531,达55.3%。其制备条件为m(NaOH/LREPS)为3.5∶1,m(CCA/LREPS)为0.25∶1,醚化温度为40℃,醚化时间为5h。红外分析证明LREPS修饰产物确实连上了羧甲基集团;理化性质测定表明其溶解度有一定的提高,黏度则相应的降低。 制备纳米硒化LREPS(Nano-Se-LREPS)时,通过改变SeO2的剂量,多糖的用量,Vc的用量,超声的时间来制备出不同硒含量的Nano-Se-LREPS样品,对其进行体内外抗肿瘤活性检测,选出最适硒含量的Nano-Se-LREPS,并以扫描电镜和透射电镜对其结构进行表征,采用激光粒度分析仪对其粒径进行分析,结果表明不同硒含量的Nano-Se-LREPS在体外对鼠肉瘤S180及人肝癌Hep G2细胞均有一定的抑制作用,而动物实验表明不同硒含量的Nano-Se-LREPS对小鼠肉瘤S180有体内抑制作用,其中硒含量为16.2μg/mg的Nano-Se-LREPS抗肿瘤活性最高,达到74.6%。扫描电镜及透射电镜结果表明此浓度下LREPS可较好的吸附包裹纳米硒,并维持其纳米结构的稳定,激光粒度分析测得最佳硒含量的Nano-Se-LREPS粒径达到380nm左右。 在REPS及LREPS的口服效果实验中,分别以接种肿瘤前5d开始给药以及接种肿瘤后再给药两种方法来向小鼠灌胃给药,结果表明,REPS(建模-给药组)抑瘤率为35.88%~45.81%,LREPS(建模-给药组)抑瘤率为43.52%~48.86%,提前给药组的抑瘤效果明显比建模后给药组的抑瘤效果好,最高可分别达到57.25%和58.02%。 上述结果表明,LREPS经修饰后抗肿瘤活性得到明显改善,获取了相关理化及生物学技术参数,且口服REPS及LREPS也具有一定抗肿瘤及增强免疫的疗效,为该多糖制剂的生产应用奠定了一定的基础。
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