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研究背景：
缺血性脑血管病是临床常见危重疾病,且致死致残率高。迅速溶栓复流治疗是脑缺血急性期治疗成功的前提和基础,但溶栓治疗可导致血脑屏障破坏,从而引起脑出血和脑水肿,同时机体内释放大量的细胞和化学因子可以调控血脑屏障的开放。目前研究表明,脑缺血再灌注后血脑屏障损伤的主要机制为炎症因子的浸润,蛋白酶的水解作用以及水通道蛋白的开放等。我室前期研究表明,从中药山茱萸中提取制备的有效成分莫诺苷能够促进SH-SY5Y神经细胞生长,抑制其凋亡,从而对神经细胞产生保护作用。但莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用尚未见报道。
目的：
以线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,研究莫诺苷对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障保护作用及其机制,为其临床应用奠定前期研究基础。
方法
1、采用改良Zea Longa线栓法制备Wistar大鼠脑缺血再灌注模型,缺血30min后,再灌注72h。造模成功大鼠随机分为假手术组,模型组,莫诺苷小(30mg/kg)、中(90mg/kg)、大(270mg/kg)剂量组和阳性药组。每组8只,术后连续灌胃给药3d,每天1次,其中假手术组和模型组给予等量的生理盐水。
2、对脑缺血再灌注后当天和术后72h的大鼠进行神经行为学评分,包括Zea longa法、爬网格、平衡木、吊绳、Ludmila Belayer 12分评分法。
3、采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-tetrazolium chloride,TTC)染色,检测大鼠缺血再灌注后72h的脑梗死体积百分比。
4、应用分光光度法检测大鼠脑组织患侧皮层中抗氧化指标的变化,包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathion,GSH)以及总抗氧化能力(total antioxidative capacity,T-AOC)。
5、用免疫组织化学方法观察患侧脑组织炎性细胞因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、基质会属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的表达水平。
结果
1、莫诺苷连续灌胃给药3d后,大、中剂量组大鼠脑梗死体积百分比与模型组相比显著减少(p<0.05)。
2、脑缺血再灌注后当天,手术组大鼠神经行为学评分明显下降(p<0.01),包括Zea Longa法、爬网格、平行木、吊绳、Ludmila Belayer 12分评分法。但莫诺苷连续灌胃给药3d后,上述神经行为学指标明显升高,提示莫诺苷可能改善脑缺血再灌注大鼠神经功能。
3、脑缺血再灌注后72h,与假手术组相比,模型组大鼠脑组织SOD、GSH、T-AOC水平显著降低(p<0.05),MDA含量显著增加(p<0.05)；但莫诺苷连续灌胃给药3d后,SOD、GSH、T-AOC水平与模型组相比显著增加(p<0.05),而MDA含量降低(p<0.05)。
4、脑缺血再灌注72h后,与假手术组相比,模型组大鼠脑组织IL-1β、TNF-α的表达显著增强(p<0.01)；但莫诺苷连续灌胃给药3d后,IL-1β、TNF-α的表达水平与模型组相比显著降低(p<0.01)。
5、脑缺血再灌注72h后,与假手术组相比,模型组大鼠脑组织MMP-2、MMP-9的表达显著增强(p<0.01)；但莫诺苷连续灌胃给药3d后,MMP-2、MMP-9的表达水平与模型组相比显著降低(p<0.01)。
结论
莫诺苷能够通过减少脑梗死体积,改善神经行为学评分,从而对脑缺血再灌注损伤起到神经保护作用。莫诺苷发挥脑保护作用的主要机制可能为:增强损伤脑组织的抗氧化能力,减少中枢神经系统的炎症反应,抑制金属基质蛋白酶对脑组织的破坏,进一步达到对血脑屏障的保护作用。因此在治疗缺血性脑血管病中,莫诺苷作为一种神经保护药可能有良好的应用前景和开发空间。