人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,hFⅧ)在人凝血机制内部途径的级联反应中起着必不可少的作用,该因子的先天性缺陷会导致甲型血友病。目前,临床上治疗这种疾病多采用蛋白替代疗法,即输入含hFⅧ的制剂。世界上血友病患者众多,发病率在1/10000-3/10000。如此大的需求量单靠从血浆中提取无法满足市场的需求。因此,利用基因工程方法生产hFⅧ无疑具有巨大的商业价值。鉴于毕赤酵母自身强力的表达系统,本文利用毕赤酵母GS115为受体菌,筛选出能分泌重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factorⅧ,rhFⅧ)的基因工程菌株,并对该蛋白的发酵条件进行初步研究。本文在构建rhFⅧ基因工程菌时采用了适合该菌株的分泌型表达载体pPIC9,成功构建了重组表达质粒pPIC9-FⅧ。该质粒经SalI线性化,电转化整合入毕赤酵母GS115的染色体中。经基因组PCR筛选出阳性克隆,MM和MD平板筛选出His~+ Mut~+表型,BMGY/BMMY培养基摇瓶振荡培养,SDS-PAGE鉴定培养物上清等步骤,最终得到能表达rhFⅧ的阳性菌株。对其表达模式的研究发现,随着诱导时间的延长,该蛋白的表达量增加,并在144h达到高峰。本论文通过BMGY/BMMY培养基摇瓶振荡培养对发酵条件进行了摸索。结果显示,在28℃,250rpm,每24h添加1%甲醇的诱导条件下rhFⅧ有微弱表达。以上结果表明,本研究利用毕赤酵母成功表达了hFⅧ蛋白,虽然表达量极低,但这为进一步研究hFⅧ在毕赤酵母中的高效表达打下了基础。