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目的：体外接种MCF-10AT细胞建立乳腺癌癌前病变裸鼠模型,选用复方仙蓉颗粒进行实验性干预,探讨乳腺癌的癌变过程,探索复方仙蓉颗粒防治乳腺癌癌前病变的作用机制,为中医药防治乳腺癌癌前病变提供实验依据。
方法：
1.不同浓度复方仙蓉颗粒(Compound Xian Rong Granules,CXRG)和三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)干预48h起,应用MTT法绘制细胞生长曲线,计算细胞生长抑制率；应用Logit法计算CXRG干预48h细胞的IC50。
2.应用脂质体介导基因转染法将wt-p53导入MCF-10AT细胞中,并应用荧光显微镜、RealTime PCR及Western blot鉴定转染效率。
3.应用流式细胞术及TUNEL法检测不同浓度CXRG组和TAM组MCF-10AT细胞转染前后的凋亡情况。
4.应用Real Time PCR检测不同浓度CXRG组和TAM组MCF-10AT细胞转染前后hTERT、p53 mRNA的表达,应用Western blot检测p53蛋白的表达。
5.接种MCF-10AT细胞于BALB/c雌性裸鼠,并肌注苯甲酸雌二醇建立乳腺癌癌前病变模型。随机分为模型组、CXRG组、TAM组,每组20只。分接种后21d、35d、49d、63d,分组采集移植瘤组织,观察其组织形态学变化,并用Real Time PCR检测移植瘤hTERT、p53 mRNA表达,应用Western blot检测移植瘤p53蛋白表达。
结论：
1.复方仙蓉颗粒和三苯氧胺均能够抑制MCF-10AT细胞的体外增殖,诱导转染wt-p53前后MCF-10AT细胞发生凋亡,复方仙蓉颗粒(生药量：3.4mg/ml)作用优于三苯氧胺(8μg/ml)。
2.复方仙蓉颗粒和三苯氧胺均能够抑制MCF-10AT细胞乳腺癌癌前病变移植瘤的生长,复方仙蓉颗粒(生药量：1g/ml)的抑制作用优于三苯氧胺(130μg/ml)。
3.转染wt-p53后MCF-10AT细胞的端粒酶表达水平低于转染前。提示野生型p53可能通过调控端粒酶,诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖。
4.与接种后21d、35d相比,接种后49d,MCF-10AT细胞乳腺癌癌前病变移植瘤组织的p53和端粒酶表达量明显增加,此期也是移植瘤组织发生不典型导管增生的高峰。因此,p53和端粒酶的激活可能是MCF-10AT细胞乳腺癌癌前病变移植瘤组织恶变的机制之一。
5.乳腺癌变的发生机制及中医药干预乳腺癌癌前病变的机制非常复杂,有待于今后进一步深入研究。