【摘 要】
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研究方法:首先用限制性内切酶从质粒pS60-10中获得人类Cu/Zn-SOD的cDNA,然后将其克隆在反转录病毒载体pLXSN的多克隆位点上,获得重组SOD基因-反转录病毒载体——pLSSN.用Lipo
【出 处】
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北京医科大学 北京大学医学部 北京大学
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研究方法:首先用限制性内切酶从质粒pS60-10中获得人类Cu/Zn-SOD的cDNA,然后将其克隆在反转录病毒载体pLXSN的多克隆位点上,获得重组SOD基因-反转录病毒载体——pLSSN.用Lipofectin介导pLSSN转导ψ2细胞,所获得的假病毒悬液再感染PA317细胞,将其包装成为有一次性感染能力的双嗜性重组病毒.PA317细胞系产生的重组病毒用以转染培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,并用Northern印迹法检测大鼠VSMC中人类Cu/Zn-SOD基因mRNA的表达,用放射免疫分析法和亚硝酸盐还原法对VSMC表达的SOD进行定量分析和活性测定.结果表明:应用反转录病毒基因转移系统可以在大鼠的平滑肌细胞中高效表达人类Cu/Zn-SOD,提示基因转移技术可以为在细胞水平上进一步研究氧自由基和机体抗氧化防御系统的生理功能提供良好的实验模型.
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