干细胞是一类具有自我更新和增殖分化潜能的原始细胞,这种细胞能分化为特定组织中一个或者多个具有特定功能的终末细胞。成体干细胞的主要生物学特征是自我更新和增殖分化形成新生成熟组织,与恶性肿瘤细胞的生长繁殖、转移扩散以及放化疗后的再生复发十分相似。根据干细胞的这种生物学特性和恶性肿瘤在临床上的生物学表现,近年来提出在肿瘤的瘤体内也存在与干细胞具有相似生物学活性的一类细胞群体,科学家命名这种存在于肿瘤细胞群体中的特殊细胞为肿瘤干细胞(cancer stem cell),或称之为肿瘤起始细胞(tumor initiating cell, T- Ic)。最近几年报道的大量的资料表明,大多数肿瘤细胞群中存在肿瘤干细胞,它在肿瘤发生、发展、转移和复发中起关键作用。它可能从根本上改变人们对肿瘤的认识,是肿瘤治疗新靶标的希望所在[1],因此人们对其生物学特性及其特异标记基因深入研究。本课题就是采用不同的培养体系在肿瘤细胞中分选培养肿瘤干细胞样细胞,检测肿瘤干细胞标记基因的表达情况。本论文采用不同肿瘤干细胞培养体系逐步筛选适合肝癌结肠癌干细胞样细胞培养的新型培养体系,将各种肿瘤干细胞培养液编为A1、A2、B1、B2、C1、C2、C3。实验结果表明B1为适合结肠癌干细胞样细胞培养的新型培养体系,而B1,C1,C3为适合肝癌干细胞样细胞培养的新型培养体系。肿瘤干细胞培养液A1、A2培养细胞时,A1干细胞培养液培养的细胞不会形成悬浮细胞球体,A2干细胞培养液培养的细胞零散聚集或是细胞球体不能连续传代;B1、B2干细胞培养液中,B1肿瘤干细胞培养液培养的人肝癌细胞系Hep3B细胞和人结肠癌细胞系SW620细胞具有球状体出现,与文献[21,22]中所报道的CSC形态类似,检测的CSC标记基因均有高表达。人结肠癌细胞系SW620细胞来源的悬浮细胞球能够连续传代下去,可连续培养两个月,保存建系。人肝癌细胞系Hep3B细胞来源的悬浮细胞球能够连续传代一个月。利用C1、C2、C3肿瘤干细胞培养体系培养人肝癌细胞系Hep3B细胞和Huh7细胞,用C1、C3培养两天后传代,传代后第二天发现细胞悬浮,并聚集成球状体细胞较透亮,再次传代后仍有细胞聚集,与受精卵发育到四细胞期、八细胞期似的聚集,部分细胞死亡部分细胞生长,悬浮细胞球体能够连续传代下去,并检测CSC标记基因均有高表达,保存建系。本课题的研究表明我们建立了几种适合肝癌结肠癌肿瘤干细胞样细胞培养的肿瘤干细胞培养体系。并且能够从肿瘤细胞系中分选并培养得到肿瘤干细胞样的细胞,其形态及标记基因的表达均与文献上所报道的肿瘤干细胞相似,并建系,为肿瘤干细胞研究的后续实验奠定基础。