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目的肺癌是目前发病率和死亡率增长最快,对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一,其死者中80%为非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者。寻找调控NSCLC进展的关键因子,揭示其发挥调控作用的分子机制将有助于临床对NSCLC的诊断及治疗。结合粘附分子A(Junctional adhesion molecule A,JAM-A)为细胞间粘附分子,结构上属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,为免疫球蛋白超家族成员。JAM-A主要表达于上皮细胞、内皮细胞的细胞连接处,还广泛表达于多种血液细胞。此外,JAM-A在多种肿瘤组织中均有表达,其对肿瘤进展的调控似乎存在“双向性”,不但可发挥促进肿瘤进展的作用,还可发挥抑制作用,目前此领域的研究结果存在较大争议。本课题组前期研究发现,在NSCLC组织中JAM-A表达高于癌旁组织,且与患者TNM分期、淋巴结转移及不良预后正相关,细胞学实验发现JAM-A可通过调节Cyclin D1、CDK4等细胞周期蛋白的表达及活化水平进而调控NSCLC细胞增殖,但其在NSCLC迁移和侵袭过程中发挥的作用及调控机制尚有待进一步研究。本研究旨在明确JAM-A对NSCLC侵袭、转移能力的调控作用,寻找关键下游信号分子,进而揭示其分子机制。方法通过生物信息学方法分析了JAM-A表达与肺癌患者预后之间的关系。在NSCLC细胞株H1299及A549中,分别转染JAM-A表达载体或shRNA差异表达JAM-A用于后续实验。分别通过划痕实验及Transwell实验检测JAM-A对NSCLC细胞迁移及侵袭能力的调控作用。通过Western blot实验检测上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail及Slug的表达变化,检测EMT相关信号通路p-JNK、β-catenin及c-myc的表达变化,检测在其他研究报道中可能位于JAM-A下游的Akt及β1-integrin等相关通路的活化情况。为明确JAM-A调控NSCLC细胞迁移及侵袭的机制,在过表达JAM-A组加入p-JNK抑制剂SP600125进行回复实验,通过划痕及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力是否得到回复,通过Western blot检测E-cadherin及N-cadherin等EMT相关蛋白的表达水平是否得到回复。结果通过生物信息学分析发现,NSCLC组织中JAM-A mRNA高转录水平组患者总生存期明显低于JAM-A低转录水平组。在H1299及A549细胞中成功上调或下调JAM-A蛋白表达水平后,经划痕实验及Transwell实验发现,过表达JAM-A后提高了NSCLC细胞的迁移及侵袭能力,而下调JAM-A后其迁移及侵袭能力得到抑制,这表明JAM-A可促进NSCLC细胞进行迁移及侵袭。经Western blot实验检测发现NSCLC细胞中EMT相关蛋白E-cadherin的表达与JAM-A表达负相关,而N-cadherin、Snail及Slug的表达与JAM-A表达正相关,这提示JAM-A可能通过调节EMT过程促进NSCLC细胞迁移及侵袭。通过Western blot实验检测EMT相关信号通路发现,过表达JAM-A后JNK磷酸化水平升高,而下调JAM-A后得到相反结果,加入p-JNK抑制剂SP600125后,过表达JAM-A提升的NSCLC细胞迁移及侵袭能力得到回复,同时过表达JAM-A引起的E-cadherin及N-cadherin的表达变化在经SP600125处理后也得到相应回复,这表明JAM-A可通过上调pJNK促进EMT进而促进NSCLC迁移及侵袭。结论1.JAM-A可促进NSCLC细胞侵袭、转移。2.JAM-A可通过激活JNK信号通路诱导NSCLC细胞发生EMT,进而促进肿瘤细胞迁移及侵袭。