火炭母生药质量及抑菌、保肝、抗乙肝病毒药效实验研究

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目的:①对火炭母进行生药鉴定研究。  ②火炭母中总黄酮和槲皮素的含量测定研究。  ③火炭母抑制细菌,抗乙肝病毒,保护肝脏的药效实验研究。  方法:①分别采用原植物鉴定、性状鉴定、显微鉴定与理化鉴定的方法对火炭母进行生药鉴定研究。  ②采用紫外-可见分光光度法(UV-Vis法),以芦丁为对照品,以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色体系显色,对火炭母进行总黄酮含量测定方法研究;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC法)对火炭母进行槲皮素的含量测定方法研究;并对9个产地火炭母分别进行总黄酮和槲皮素的含量测定。  ③采用二倍稀释法,探讨火炭母醇提物对12种常见致病菌的最低抑菌浓度(MIC);以火炭母醇提液作用于HBV-DNA克隆转染人肝癌细胞的2.2.15细胞系(HepG2.2.15细胞),通过四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测药物的细胞毒性,用酶联免疫吸附实验法(ELISA法)检测细胞培养液中的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的分泌水平;用四氯化碳建立急性肝损伤模型,以血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量为指标,结合肝组织病理切片,对口服火炭母醇提物的大鼠进行保肝药效学研究。  结果:①火炭母上部叶近无柄或抱茎,下部叶叶柄基部有时具一耳垂形小裂片;叶上表面或有“V”形斑块,下表面沿叶脉疏生短柔毛;头状花序常数个排列成圆锥花序,花序梗被柔毛。火炭母根横切面见皮层狭窄,韧皮部成环;茎横切面见中柱鞘纤维波浪环带状排列,韧皮部呈狭窄环带状;叶横切面见主脉维管束2~6个排列成环,两侧均有木化纤维束;叶上表皮具类圆形分泌细胞与多细胞腺毛,下表皮具多细胞腺毛,主脉处可见多列形非腺毛;粉末见多细胞头腺毛、细胞多列形非腺毛、类圆形分泌细胞、散孔状花粉粒、草酸钙簇晶及晶鞘纤维、棕色条块等特征。火炭母供试品薄层色谱中,与槲皮素对照品色谱相应的位臵上,显相同黄色荧光斑点。火炭母药材氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取液在408~411 nm与664~668 nm附近特征峰吸收较大,可作为火炭母紫外-可见特征吸收鉴别峰。  ②火炭母总黄酮含量测定的标准曲线方程为A=13.65C-0.0045(r=0.9999),对照品芦丁在0.00864~0.06912 mg·mL-1的浓度范围内线性关系良好,平均回收率为99.07%,RSD=1.36%,样品中总黄酮含量为1.60~3.74%;火炭母槲皮素含量测定的标准曲线方程为:A=85355C-48.16(r=0.9993),对照品槲皮素在0.004~0.012 mg·mL-1浓度范围内线性关系良好,平均回收率为100.3%,RSD=1.44%,样品中槲皮素含量为183.0~848.1μg·g-1。  ③火炭母醇提物对11种常见致病菌有抑制作用,其中对变形杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、甲型链球菌、乙型链球菌的效果较好。火炭母醇提液对HepG2.2.15细胞培养中的HBsAg、HBeAg分泌具有抑制作用,对细胞也具有一定毒性。口服火炭母醇提液对四氯化碳造模大鼠血清中ALT、MDA活性的升高有明显抑制作用,并能升高SOD活性。  结论:①原植物鉴定、性状鉴定、显微鉴定与理化鉴定等方法的结果均对火炭母药材具有鉴定意义。  ②火炭母总黄酮和槲皮素的含量测定方法所用方法简便、准确,为火炭母药材的质量标准的制定提供参考。  ③火炭母醇提物对多种常见致病菌有抑制作用;体外对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg具有一定的抑制作用;对大鼠急性肝损伤具有良好保护作用。
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