PRRSV湖南株的分离鉴定及XH-GD株NSP2部分缺失感染性克隆的构建

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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种以母猪繁殖障碍和断奶仔猪呼吸道疾病为主要特征的传染病,其病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus,PRRSV)为目前严重影响养猪业的重要病原体之一。2006年之后在我国分离到的Nsp2编码区不连续缺失30个氨基酸的高致病性毒株,给我国养猪业造成了重大危害。  本研究从湖南某发病猪场送检的血清中成功分离到一株蓝耳病病毒,试验通过接种Marc-145细胞传代后产生明显而稳定的细胞病变,又经过RT-PCR及IFA检测成功验证。通过对分离株的全基因组的测序结果表明,其核苷酸序列与欧洲型代表株LV株及北美经典毒株VR-2332、国内高致病性变异株JXA1的相似性分别为60.8%、88.5%、97.4%,说明其属于美洲型;分离株与JXA1等高致病性变异株的Nsp2比较后发现,其也在同一位置不连续缺失30个氨基酸。遗传进化树分析表明该分离株与2006年之后分离的高致病性变异株同属于一个亚群。结果表明,该毒株为北美型变异株,命名为PRRSV HuN株。  非结构蛋白Nsp2是PRRSV中最易发生变异的蛋白,对病毒的复制具有重要的作用。为了研究Nsp2编码区某些区域对病毒体外的复制影响,本研究利用实验室已建立的基于PRRSV XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了3个Nsp2编码区部分缺失的全长质粒,它们分别连续缺失209个氨基酸(pOK-AaBCD)、114个氨基酸(pOK-AbBCD)及96个氨基酸(pOK-AcBCD)。对这3个质粒进行拯救,结果表明,在Nsp2编码区部分缺失114个氨基酸的pOK-AbBCD能在体外MARC-145细胞上进行增殖,这一缺失区域为病毒复制的非必需区;而其他两个质粒通过拯救后不能在MARC-145细胞上增殖,推测这两个缺失区域可能与病毒的复制相关。本研究结果为进一步探讨Nsp2的基因序列的缺失与PRRSV毒力之间的关系奠定了基础。
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