【目的】下腰痛(Low Back Pain,LBP)是骨科临床最常见的主诉之一。据报道,全世界范围内70%-85%的人在一生中至少会经历一次LBP,其中5%最终发展为慢性LBP,严重影响患者的生活质量,并且增加患者的经济负担。有症状的椎间盘退变(Intervertebral Disc Degeneration,IDD)是引起LBP最重要的因素之一,约占所有引起LBP因素的40%。越来越多的研究报道非编码RNA(Non-coding RNA,ncRNA):微小RNA(Micro RNA,miRNA)以及新兴的环状RNA(Cicular RNA,circRNA)在IDD的发生与进展中发挥重要作用。CircRNA最常见的功能是作为基因表达的主要调节因子,其可在细胞质中吸附或隔离miRNA,间接调控miRNA靶基因的表达。目前已有研究报道circRNAs通过介导髓核细胞(Nucleus Pulposus Cells,NPCs)凋亡,以及调控炎症因子、基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)、去去去素去金属蛋白酶去小去去去蛋白基去(A Disintegrin and Metalloproteinase with Thrombospondin Motifs,ADAMTS)、多种凋亡蛋白去细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)的表达,不同程度地参与调控IDD的病理过程。然而,目前关于circRNA调控IDD的相关机制仍不清楚。本研究旨在寻找新的关键circRNA与miRNA,并探索其相互之间的调控机制,以期为临床干预IDD的治疗研究提供新的策略。【方法】1.基于本团队前期的生物信息学分析,确定关键circRNA去相对去的关键miRNA为研究对为。2.在人NPCs中利用荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)实验检测关键circRNA去miRNA定位于NPCs的细胞核还是细胞质。3.在NPCs中通过荧光素酶报告基因实验验证circRNA去miRNA的结去位点的有效性。4.在NPCs中过表达关键circRNA的水平。【结果】1.基于本团队前期的生物信息学分析,筛选circ-FAM169A去miR-583进行下一步研究。2.FISH实验验证circ-FAM169A去miR-583共同存在于NPCs的细胞质中。3.荧光素酶报告基因实验表明:在NPCs中共转染circ-FAM169A去miR-583时,miR-583 mimic去miR-583 inhibitor组分别与阴性对照组相比较,差异极显著(P<0.01)。当转染circ-FAM169A-mut1时,结果统计分析没有差异;而转染circ-FAM169A-mut2时,结果统计分析依然有明显差异。推测miR-583与circ-FAM169A在第一号位点处存在相互作用。4.本研究成功构建circ-FAM169A的过表达(Overexpression,OE)载体,与对照组相比,circ-FAM169A OE组在NPCs的表达被上调4712.81倍(P<0.01)。结果表明circ-FAM169A OE可用于下一步的功能验证实验。【结论】1.本研究明确了circ-FAM169A与miR-583分别是调控IDD过程中的关键circRNA与关键miRNA。2.揭示了circ-FAM169A-miR-583轴在调控IDD过程中可能发挥重要作用。3.此结果为进一步研究IDD的发病机制与临床干预治疗提供了理论依据。