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内源性反转录病毒(EndogenousRetrovirus，ERV)是指存在于动物体内或体外培养细胞基因组内的反转录病毒，现已在人、猴、猩猩、猫、犬等哺乳动物，鸡、鸭、鹌鹑等鸟类及鱼类、爬行动物的体内分离或观察到这类病毒。20世纪70年代初，在猪的多种体外培养细胞系中发现了自主释放的C型反转录病毒粒子，即猪内源性反转录病毒(porcineendogenousretrovirus，PERV)。由于猪的心血管系统、消化系统、皮肤系统等与人类具有较大的相似性，一直是人类异种器官移植的首选供体。但是，自从1997年Patience等发现PERV在体外可以感染多种人源细胞以来，猪→人异种移植的PERV安全性问题引起了人们广泛关注。
本实验采用基因载体免疫的方法制备抗PERVGag蛋白的单克隆抗体。在已构建的原核表达载体pGEX-gag的基础上，PCR法将PERVgag基因(约1572bp)进行扩增和克隆并亚克隆进真核表达载体pVAXI。经菌落PCR、单双酶切鉴定以及核酸序列测定，最终构建成序列正确的真核表达载体，并将该质粒命名为pVAX-gag。以4％span80和2％甘油作为免疫佐剂免疫五只雌性Balb/c小鼠，2个月后应用间接ELISA法测定鼠尾血清的抗体效价，结果除1只血清效价为1：2000外，其余4只均达到1：4000。根据血清抗体效价的测定结果，选择效价最高的小鼠脾细胞与鼠源SP2/0骨髓瘤细胞用聚乙二醇法(PEG)融合，采用1％HAT培养基进行选择性培养。约1周后选择生长有融合细胞的克隆孔以间接ELISA法进行阳性克隆筛选，用有限稀释法筛选阳性单克隆细胞株，经过3～4次单克隆筛选后获得了4株分泌抗PERVGag蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。效价测定结果表明其中1株单抗其细胞培养上清效价达到1∶100，腹水效价达到1∶8×105。通过Giemsa染色体染色鉴定法，证明所获得的杂交瘤细胞的染色体数目接近小鼠脾细胞与SP2/0细胞的染色体数目之和。用抗体亚类鉴定试剂盒对得到的4株杂交瘤细胞株进行了亚类鉴定，除1株为IgG2b类抗体分子外，其余3株为IgM类抗体分子。用Western-Blotting试验、间接ELISA法对得到的单克隆抗体进行了特异性鉴定，结果表明4株McAb既可与PERVgag基因的重组表达产物发生特异性反应，也可与PERV病毒粒子中的天然Gag蛋白发生特异性反应。从Balb/c小鼠的腹腔中回收腹水，经PEG6000沉淀粗提单抗后，用丙烯葡聚糖凝胶层析法(“分子筛，，)纯化单克隆抗体。本实验为进一步建立PERV的单克隆抗体检测技术奠定了物质基础。同时，证明当某些抗原不易获得或数量不能满足免疫的需要时，基因免疫是一条可供选择的免疫方法。