鹅细小病毒非结构蛋白NS1基因的克隆及原核表达

来源 :莱阳农学院 青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fatcatgao
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鹅细小病毒(GooseParvovirus,GPV)是小鹅瘟的直接病原。临床病理变化以消化道,尤其是小肠部位典型纤维性栓塞为特征。GPV是细小病毒科、细小病毒属成员,属自主复制型细小病毒。病毒基因组为单股、线性DNA,核苷酸序列长约5.1kb,含有两个开放阅读框架(ORF),参与调节病毒生命周期的各个环节。   检索GenBank所发表的GPVB株全基因序列,借助PrimerPremier5.0和0ligo6.44软件设计一对引物,采用PCR技术扩增GPVYZ株非结构蛋白NSl基因,并与PMD18-T载体连接后测序。利用软件DNAssist2.2对测序结果进行分析,结果表明:GPVYZ株非结构蛋白NSl基因核苷酸全长1881bp,编码627个氨基酸残基。与GPVB株的NSl基因相比,核苷酸数目相同,有36个碱基、13个氨基酸的差异。二者核苷酸序列同源性为98.09%,推导氨基酸序列同源性为97.93%。   将NSl基因插入到原核表达质粒PQE-30Xa的BamHⅠ、SalⅠ多克隆位点之间,将重组原核表达质粒PQE-30Xa-NSl转化到大肠杆菌M15感受态细胞中,获得表达NSl基因的阳性重组子,在含Amp的LB液体培养基中培养,经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物。结果表明:NSl基因在原核表达细菌大肠杆菌M15中获得了高效表达,表达产物为约73ku的融合蛋白,表达量达菌体总蛋白的26.5%。   应用蛋白质分析软件ANTHEPROT5.0对得到的GPVYZ株的NSl蛋白进行蛋白序列的理化特性、蛋白质的二级结构、蛋白滴定曲线与等电点、蛋白序列分子量、比重与各蛋白残基百分组成、蛋白质信号肽潜在的断裂位点等进行分析,得出了相应的特征曲线和分析结果,为进一步研究其生物和免疫学性质奠定了基础。
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