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目的：从转录因子和细胞因子不同层面了解评价哮喘缓解期患儿体内Th1/Th2免疫平衡的状况。观察补肾(阳)中药体外干预对Th1/Th2细胞平衡的调节作用，探讨其治疗哮喘的机制。
方法：
第一部分：哮喘缓解期患儿体内Th1/Th2平衡状况的研究1 ELISA法检测24名哮喘缓解期患儿(病例组)与12名对照组儿童血清IFN-γ浓度和IL-4浓度。
2实时荧光定量PCR技术检测24名哮喘缓解期患儿与12名对照组儿童外周血单个核细胞特异性转录因子T-bet、GATA-3mRNA水平的表达。
第二部分：补肾中药调节Th1/Th2平衡机理的研究1 哮喘缓解期儿童20例，抽取静脉抗凝血3ml，无菌条件下Ficoll法分离单个核细胞(PBMC)。每一个哮喘患儿单个核细胞平均分为3部分，分为对照组、治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组，分别加入RPMI-1640培养液、3％的补肾中药提纯制剂(喘可治注射液)、1.5％的补肾中药提纯制剂(喘可治注射液)，37℃、5％CO<,2>于细胞培养箱中培养48h，收集细胞沉淀。
2 抽提RNA、逆转录、实时荧光定量PCR检测T-betmRNA、GATA-3mRNA的表达强度及细胞因子IFN-γmRNA、IL-4mRNA的表达水平。
统计学分析：
所有数据均以均数士标准差表示，采用SPSS11.5统计软件处理。P<0.05表示有统计学意义。
结果：
第一部分：
1.病例组血清IFN-γ的水平低于对照组，但两者差别无统计学意义(P>0.05)。病例组血清中IL-4的水平显著高于对照组，其差异有统计学意义(P<0.05)。
2.病例组PBMC中T-betmRNA的表达强度较对照组降低，但两者差别无统计学意义(P>0.05)；而GATA-3mRNA的表达强度较对照组显著增高，具有统计学意义(P<0.05)。
3.病例组与对照组相比IFN-γ/IL-4及T-bet/GATA-3的比值均显著降低(P<0.05，P<0.01)．。
4.以T-bet/GATA-3的比值为自变量，以IFN-γ、IL-4为因变量分别建立一元线性回归方程，可见IFN-γ、IL-4的数值变化与T-bet/GATA-3的比值密切相关。
第二部分：
5.体外培养48h后，对照组、治疗Ⅰ组、治疗Ⅱ组三组之间比较，T-betmRNA、IFN-γmRNA、IL-4mRNA的表达强度均有显著性差异(P<0.05)，GATA-3mRNA的表达强度在三组之间无显著性差异。
6.不同剂量补肾中药干预后，PBMC中T-betmRNA的表达均较对照组显著增强；均有统计学意义(P<0.05)，以治疗Ⅱ组的差异更为明显(P<0.01)；治疗组与对照组相比GATA-3mRNA的表达强度无明显差异；治疗组的PBMC中IFN-γmRNA的表达较对照组增强，其中治疗Ⅱ组较对照组增强具有统计学意义(P<0.05)；治疗组的PBMC中IL-4mRNA的表达强度较对照组减低，其中治疗Ⅱ组IL-4mRNA的表达强度显著减低，有统计学意义(P<0.01)。
7.体外培养48h后，对照组、治疗Ⅰ组、治疗Ⅱ组三组之间比较，T-bet/GATA-3的比值无显著性差异，IFN-γ/IL-4的比值有显著性差异(P<0.05)8 治疗组的T-bet/GATA-3的比值均较对照组升高，但无统计学意义；治疗组的IFN-γ/IL-4的比值较对照组上升，其中治疗Ⅱ组与对照组相比IFN-γ/IL-4的比值显著升高，有统计学意义(P<0.05)。
结论：
1.哮喘缓解期患儿外周血PBMCs中GATA3mRNA表达水平显著高于正常儿童(P<0.05)，血清中IL-4的水平亦显著高于正常儿童(P<0.05)，提示哮喘缓解期患儿体内存在Th2细胞功能的亢进。
2.哮喘缓解期患儿与正常儿童相比IFN-γ/IL-4及T-bet/GATA-3的比值均显著降低(P<0.05，P<0.01)，提示哮喘缓解期患儿在基因和蛋白质水平均存在Th1/Th2平衡的紊乱。
3.体外细胞培养实验结果显示，补肾中药可以上调PBMC中IFN-γmRNA的表达(P<0.05)，同时下调IL-4mRNA的表达(P<0.05)，使IFN-γ/IL-4的比值显著升高(P<0.05)。据此认为补肾中药可以通过上调Th1类细胞因子同时下调Th2类细胞因子，纠正Th1/Th2细胞因子的比值失衡，推测这可能是其调节免疫治疗哮喘的机制之一。
4.补肾中药提纯制剂(CKZ注射液)体外细胞培养结果显示，治疗组细胞沉淀中T-betmRNA的表达均较对照组显著增强(P<0.01)，提示补肾中药可以在转录水平通过增强T-bet的表达，调节Th1/Th2细胞的发育，诱导Th前体细胞向Th1细胞方向分化。