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目的：构建多药耐药基因(MDR1)的短发卡RNA(short hairpin RNA shRNA)表达质粒，并检测其对胶质瘤干细胞药物敏感性的影响作用，为胶质瘤的基因治疗提供实验依据。
方法
1．根据MDR1的DNA序列设计shRNA，3’端加入终止信号TTTTTT，两端分别加入BamH Ⅰ和Hind Ⅲ的酶切位点，并加入LOOP环(UUCAAGAGA)形成shRNA结构，克隆入pSilencer3.1-H1 neo质粒，建立shRNA表达质粒系统，酶切，测序鉴定正确后扩增质粒。
2．胶质瘤干细胞培养传代。
3．实验细胞随机分为空白对照，阴性质粒对照组，MDR1组，Siport xp-1脂质体法转染胶质瘤干细胞，检测时间点分别选为转染后第1，3，5，7天。
4．逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)，Western Blotting在mRNA和蛋白水平检测目的基因的表达。
5．对转染后的细胞进行药敏实验，评价shRNA对多药耐药性的逆转作用。
结果
1．成功构建MDR1的shRNA表达质粒，酶切，测序分析克隆成功，序列完全正确。
2．转染后的胶质瘤干细胞成指数倍增长。
3.转染实验组RT-PCR定量MDR1 mRNA相对表达水平有所下降。100 nMshRNA治疗组(49.3±4.8)％，与阴性对照组(98.7±9.8)％相比，(P<0.05)差异显著；其与50nM shRNA治疗组(78.1±5.9)％相比，(P<0.05)，差异显著。实验组目的基因mRNA在第3天后表达明显降低(P<0.05)，RT-PCR显示MDR1抑制率第3，5，7天分别为78.46±14.17，82.02±11.87，79.51±13.27。
4.Westem blot显示，shRNA转染组P-糖蛋白(P-gp)的表达降低。显示MDR1第3，5，7天抑制率分别为58.1±6.5，39.5±5.2，45.8±8.6 。
5.药敏实验显示，阿霉素、长春新碱对转染MDR1 shRNA的胶质瘤干细胞的，IC<,50>均有不同程度降低，且出现凋亡峰(P<0.05)。
结论：MDR1小干扰RNA可以在转录后水平对多药耐药进行调节，使MDR1基因表达下调，提高对药物的敏感性，诱导细胞凋亡，为胶质瘤基因治疗提供了一种新的手段。