【摘 要】
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目的:考察大叶冬青叶中三萜类化合物27-O-p-（E）-coumaroyl ursolic acid（27-CAUA）对乳腺癌细胞生长的影响及干预细胞程序性死亡通路的研究。方法:采用MTT法比较27-CAUA对不同乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞的增殖抑制作用;观察27-CAUA对不同乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞的形态的影响;采用免疫荧光法检测27-CAUA对细胞内蛋白EGFR、Her2、LC3A/B、B
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目的:考察大叶冬青叶中三萜类化合物27-O-p-（E）-coumaroyl ursolic acid（27-CAUA）对乳腺癌细胞生长的影响及干预细胞程序性死亡通路的研究。方法:采用MTT法比较27-CAUA对不同乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞的增殖抑制作用;观察27-CAUA对不同乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞的形态的影响;采用免疫荧光法检测27-CAUA对细胞内蛋白EGFR、Her2、LC3A/B、BRUCE及Cleaved Caspase-3的表达与定位的影响;采用流式细胞术检测27-CAUA对细胞内蛋白Her2及LC3A/B的表达及27-CAUA对乳腺癌细胞凋亡信号通路的影响;采用m RFP-GFP-LC3串联荧光蛋白腺病毒感染乳腺癌细胞,观察27-CAUA对乳腺癌细胞自噬信号通路的影响。结果:1.27-CAUA对MDA-MB-468、MDA-MB-435S及HCC1806细胞生长均具有一定的剂量依赖性抑制作用,对正常人体乳腺细胞MCF-10A,随剂量增加表现出先促进后抑制的趋势。2.EGFR蛋白检测结果显示,人乳腺细胞MCF-10A EGFR表达,MAD-MB-468细胞EGFR过表达,MDA-MB-435S细胞EGFR低表达,HCC1806细胞EGFR不表达。3.27-CAUA干预MDA-MB-468细胞和HCC1806细胞中Her2位置迁移,导致细胞程序性死亡通路变化。4.27-CAUA可诱导HCC1806细胞BRUCE及LC3A/B表达,经腺病毒转染后的细胞出现明显的自噬体-溶酶体的融合,表明27-CAUA可诱导HCC1806细胞自噬溶酶体形成。27-CAUA不能诱导MDA-MB-468细胞自噬溶酶体的形成。5.27-CAUA可诱导MDA-MB-468细胞Cleaved Caspase-3表达的增加。Annexin-V/PI染色流式细胞仪检测显示,27-CAUA可诱导MDA-MB-468细胞凋亡,27-CAUA无促进HCC1806细胞凋亡作用。结论:1.大叶冬青叶中三萜类化合物27-CAUA以剂量依赖性方式诱导乳腺癌细胞MDA-MB-468、HCC1806及MDA-MB-435S程序性死亡。2.27-CAUA可促进EGFR过表达乳腺癌细胞Her2的转移,也可促进EGFR不表达乳腺癌细胞Her2的转移,但移动方向受EGFR影响。3.27-CAUA诱导Her2的位移导致不同乳腺癌细胞出现程序性死亡,且导致乳腺癌细胞程序性死亡通路发生变化。
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