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目的:趋化因子CXCL12及其受体共同参与了多种慢性肝脏疾病的发病过程，本研究通过观察几种慢性肝脏病变肝组织中趋化因子CXCL12β亚型的转录及蛋白水平的表达，以及不同慢性肝脏疾病患者血清中CXCL12β的表达情况，结合患者的临床表现、实验室检查等进行分析，探讨趋化因子CXCL12β转录亚型在肝癌、肝硬化和肝纤维化中的临床意义，为上述疾病的临床诊疗提供更好的实验室证据。
方法:收集24份非重复性冰冻肝癌组织及其对应癌周组织标本，样本来源于我院外科行肝癌切除术的患者，8份冰冻正常肝组织来源于肝移植手术的供肝，所有新鲜肝组织均于离体后立刻置于-80℃备用。
收集49份肝脏石蜡组织样本，来源于行B超引导下肝穿刺术或施行肝脏切除手术的各种慢性肝病患者。根据病理诊断，将标本分为四个组：原发性肝细胞癌组(HCC)、癌周组织组(TST)、肝硬化组(LC)、肝纤维化组(LF)。正常对照(N)5例肝组织标本，来源于肝移植手术中的供肝。4份肝纤维化大鼠石蜡切片标本是由四氯化碳(CCl4)诱导的。所有标本离体后，立即甲醛固定，经常规石蜡包埋，切片厚度为5μm，置于阴凉干燥处，避光备用。
收集71例慢性肝炎患者血清样本，来源于行B超引导下肝穿刺术的患者，依据其病理诊断的肝纤维化程度：S0＼S1＼S2＼S3进行分组。此外，收集临床确诊的HCC患者血清样本26份、LC患者血清样本24份。对照组34例血清标本来源于体检健康人群。所有患者的诊断均参照2000年西安肝病会议标准。采集后的非抗凝血液标本，于室温静置2小时，待血液凝固后，经3000转/min(rpm)离心10min，分装于3个Eppendorf管内，-80℃冷冻备用。
冰冻组织标本用Trizol法提取组织总RNA，逆转录成cDNA，采用聚合酶链式反应(PCR)检测CXCL12β转录亚型在肝组织中的转录表达，并利用Quantity One软件对产物进行半定量。石蜡标本应用免疫组织化学染色(IHC)，一抗为山羊抗人CXCL12β多克隆抗体，二抗为HRP标记兔抗山羊多克隆抗体，采用DAB法显色，观察肝组织中CXCL12β表达强度，在高年资病理医师的指导下进行判读，同时采用图像分析软件Image-Pro Plus6.0处理，对结果进行半定量分析。血清标本采用酶联免疫吸附试验(ELISA)中的双抗夹心法，通过系列标准品计算标准曲线，线性范围是125pg/ml-8000pg/ml，计算出患者血清中相应CXCL12β水平。
所有结果采用Windows SPSS13.0进行统计学分析。
结果:CXCL12β在HCC、TST及N组织中均有转录表达，其相对灰度值(RGV)分别为：0.8505±0.2268、0.7213±0.1700、0.5703±0.2106。其中，HCC组高于TST组，差异具有显著性，也明显高于N组；TST组和N组在统计学上虽然没有显著性差异，但P值也接近于0.05。
在肝组织切片中，CXCL12β在HCC、TST、LC、LF、N组织中均有表达，通过显微镜观察及软件分析，发现CXCL12β在肝癌和肝硬化组织中表达量高于其它病理类型的肝组织，依次为HCC>TST>LC>LF>N。对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织检测发现CXCL12β随着纤维化程度加重其表达量明显增加。
血清ELISA检测结果表明，HCC、LC、LF、N患者血清中CXCL12β水平分别是：2487.96±1192.79、1177.12±541.78、1576.2334±1188.95、281.69±217.08pg/ml。其中HCC、LC、LF、N组间均有明显差异。将肝纤维化组依据纤维化程度(既S0、S1、S2、S3)进一步分组，CXCL12β水平分别是1500.676±593.3979pg/ml、1503.481±772.9757pg/ml、1838.711±615.1526pg/ml、1898.591±936.85971pg/ml。虽然在统计学上未发现明显差异，但是依然可以发现随着纤维化程度的加重，CXCL12β水平逐渐升高。
结论
1、趋化因子CXCL12β转录子在HCC、TST、N组织中均有表达。且其mRNA含量在不同组织中存在差异。
2、应用IHC法发现CXCL12β在N、LF、LC、TST、HCC中表达逐渐增高，依据其在不同组织中的表达特点，考虑与肝组织损伤及损伤后修复、肿瘤血管发生等有关。
3、血清学CXCL12β的表达量为：HCC>LF>LC>N。随着肝组织纤维化程度的加重，血清中CXCL12β表达量也逐渐升高，CXCL12β可能参与了肝纤维化形成。CXCL12β在LF、LC至HCC中的不同表达特点，也提示其在这些肝病的发病中可能发挥着特殊重要作用，值得进一步研究。