乙肝病毒表面蛋白PreS区在病毒成熟、装配以及感染人肝细胞等过程中发挥关键的作用,因此筛选特异性结合PreS区的短肽具有重要的理论和应用价值,将可能为寻找肝细胞表面病毒相关的结合蛋白或受体蛋白提供有用的序列和结构信息,并为研制抗乙肝病毒感染的新药提供前导分子.基于噬菌体表面展示随机肽文库的高通量筛选是目前寻找靶蛋白结合短肽的优选策略之一.该课题中,我们构建了M13噬菌体pⅧ蛋白融合的表面展示随机肽文库.同时,将完整的PreS区融合于巯氧还蛋白或几丁质结合域,在大肠杆菌中进行表达,获得了可溶性和稳定性良好的融合蛋白(thio-PreS和CBD-PreS).应用亲和层析纯化的thio-PreS和CBD-PreS对随机肽文库进行亲和筛选,从线形随机12肽文库中获得了一组特异性结合PreS的噬菌体.对这些噬菌体表面展示的短肽进行了序列测定.对其中可能具有较高PreS结合亲和力的代表性短肽做了体外结合PreS的研究,证明这些短肽能够特异性结合PreS区.更为重要的是,这些短肽主要结合于PreS1的残基21-47区段,该区段被认为是乙肝病毒附着于肝细胞质膜表面所必需的位点.上述结果提示这些短肽具有相似的PreS结合性质.对这些短肽序列的比对并结合突变分析推测出其中与PreS结合相关的保守氨基酸序列可能为-W1T2X3W4W5-.体外结合实验表明该保守序列短肽能够结合PreS区,进一步的病毒俘获实验证实化学合成的该保守序列短肽能够俘获来自乙肝病人血清的天然病毒颗粒.该保守序列可能存在于结合PreS的细胞蛋白中.应用该序列在GenBank中比对,发现数个细胞蛋白中含有该特征序列.对这些蛋白空间结构性质的分析提示脂蛋白脂酶可能结合PreS.体外结合实验证实脂蛋白脂酶的羧端结构域确实能够结合PreS,并且昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达的重组脂蛋白脂酶(或其羧端结构域)能特异性地俘获天然的乙肝病毒颗粒.总之,通过该项研究,1)获得了特异性结合乙肝病毒PreS区的短肽,这些短肽可能作为阻断乙肝病毒感染宿主肝细胞的抑制分子;2)首次发现脂蛋白脂酶能够结合乙肝病毒颗粒,可能是一种新的乙肝病毒受体候选蛋白.