狂犬病的病原是狂犬病毒。对狂犬病毒的诊断，只有通过实验室诊断，才能得到准确结果，生前的临床症状和死后的组织病变仅可作为诊断的参考。近年来，随着分子生物学和基因工程方法的发展和应用，研究者们对狂犬病毒的结构，基因序列及其主要功能，发病机制都有了更进一步的认识，使得对狂犬病的诊断与预防也更完善，通过各毒株之间的序列比较证实，狂犬病毒核蛋白在各毒株之间基因序列高度保守，广泛用于狂犬病毒的检测、基因分型及核酸疫苗的研制等研究工作。 本实验先对国内各省市地区报导的狂犬病毒株序列进行比较，确定N基因上相对保守的区域，以兽用疫苗株HEP-Flury为阳性毒株，在其N基因的保守区域内设计引物，建立诊断狂犬病毒的RT-PCR方法。用此RT-PCR方法程序检测另四个狂犬病毒毒株：SN、SN10、G1N2、L16，结果均为阳性；检测犬细小病毒、犬瘟热病毒为阴性；该方法最低可检测到20ngHEP-Flury病毒的总RNA，或4×10<4>个FFU。提取14只攻毒小鼠的海马回及延髓，用本方法与直接免疫荧光抗体试验分别进行检测,RT-PCR可检测到8个阳性，FAT可检测到6只小鼠的荧光斑点，说明用普通RT-PCR方法比直接免疫荧光染色法的敏感性更高。 本实验对N基因的保守区域又分别设计一对引物和荧光探针，建立了N基因部分片段的荧光定量PCR(real-time PCR)检测方法。该方法对仪器和试剂的要求较高，但敏感性比普通RT-PCR方法高，本实验通过对该方法的灵敏度分析，认为荧光定量PCR的灵敏度要比普通。RT-PCR方法高。 本研究建立了检测狂犬病毒的普通RT-PCR方法及荧光定量PCR方法，为研制快速检测唾液、脑组织样品中的狂犬病毒的试剂盒打下良好基础。