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目的：分离提取骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)及脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells, AMSCs)比较二者生物学特性及体外增殖能力,并探讨三种不同成神经诱导方法对AMSCs向神经样细胞分化过程中的影响,提高AMSCs向神经样细胞分化诱导效率,从而为研究AMSCs向神经样细胞分化机制奠定基础。深入探讨成球诱导方法中细胞内钙离子浓度变化,有助于阐明AMSCs的成神经诱导分化机理,为AMSCs在临床再生医学上的应用提供理论依据。方法：(1)采用密度梯度离心法分离BMSCs及酶消化法体外分离AMSCs。检测MSCs的表面抗原以及将MSCs进行体外成骨诱导,成脂诱导对MSCs的干细胞特性进行鉴定。(2)三种诱导方案诱导AMSCs向神经样细胞分化,包括化学诱导方法、鼠脑条件培养基诱导方法、成神经球分化诱导方法。观察诱导中的形态变化,免疫荧光检测神经细胞特异性标志物β-Ⅲ-Tubulin, NSE和Nissl的表达。确定最高效的诱导方法。(3)采取成神经球诱导方法对AMSCs进行诱导,利用Fluo3/AM对AMSCs及诱导过程中的类神经细胞进行染色,通过流式细胞仪对AMSCs群体细胞的钙离子浓度检测,并通过共聚焦显微镜确定单个细胞中钙离子浓度的变化,研究细胞内游离钙离子浓度在AMSCs向神经样细胞分化过程中的变化。结果：(1)获得的BMSCs及AMSCs可稳定传至20代以上。表型鉴定结果为CD13、 CD90阳性,CD34、CD45阴性,AMSCs的CD106阴性,BMSCs CD106表达弱阳性。成骨细胞分化28d时,Von kossa阳性,向脂肪细胞分化14d时,油红O染色阳性。(2)用化学因子诱导AMSCs向神经样细胞分化,30d时出现成熟神经元标记NSE的表达,阳性值为29.5%,但细胞凋亡明显。鼠脑条件培养基诱导14d时,NSE略有表达,值为12.8%。采用成神经球诱导方法进行7d成神经球诱导,再经过7-9天的分化培养。在7d时有8.9%NSE表达。β-Ⅲ-Tubulin及Nissl在经三种诱导方法诱导成熟后,均为阳性表达。(3)成球法诱导AMSCs向神经样细胞分化过程中,取AMSCs及诱导不同时间点的成神经细胞从细胞整体及个体角度分别证实：在成球诱导法诱导下,通过7天成神经球后,在继续的分化过程1-6天时细胞内钙离子浓度先呈上升趋势,在分化7-9天时达到高峰,随后急剧下落,与细胞培养时细胞发生凋亡的时间一致。结论：AMSCs较BMSCs具有较高的增殖能力,神经球分化方法更能够高效低损伤的诱导AMSCs分化为类神经细胞,细胞内游离钙离子在AMSCs向神经样细胞分化过程中会发生变化,对维持细胞分化,存活均起到了一定的作用。