大黄素单独及互联合顺铂对卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haisheng1984
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目的:1、研究大黄素(Emodin)作用于人卵巢癌细胞系SKOV3细胞及SKOV3裸鼠移植瘤的生长抑制作用;2、研究大黄素对卵巢癌细胞和卵巢癌移植瘤的凋亡诱导作用;3、检测大黄素作用前后卵巢癌细胞中凋亡相关蛋白的表达水平,探讨大黄素的作用机制;研究大黄素增强卵巢癌裸鼠移植瘤对化疗药物的敏感性的作用。   方法:MTT法检测不同浓度大黄素(10,20,40,80μM)对SKOV3的生长抑制作用;MTT法检测低浓度大黄素联合顺铂作用时对SKOV3的生长抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测大黄素单独或联合顺铂作用于卵巢癌细胞SKOV3的凋亡诱导情况;蛋白印迹法检测SKOV3细胞中caspase3、caspase9和Survivin蛋白的表达,并检测大黄素单独作用和联合顺铂对SKOV3细胞中caspase3、caspase9和Survivin蛋白表达的影响。   建立卵巢癌荷瘤裸鼠动物模型,建模成功后随机分为对照组,大黄素低浓度组、大黄素高浓度组,大黄素高浓度组,隔日腹腔用药,连续两周,观察肿瘤体积变化(RTV,RTV=V/VO,VO为分组给药前的肿瘤体积,V为用药处理过程中所测得的肿瘤体积),处死动物后完整的剖取肿瘤块,称重。   建立卵巢癌荷瘤裸鼠动物模型,建模成功后随机分为对照组,大黄素组、顺铂组,大黄素联合顺铂组,隔日腹腔用药,连续两周,观察肿瘤体积变化(RTV,RTV=V/VO,VO为分组给药前的肿瘤体积,V为用药处理过程中所测得的肿瘤体积),处死动物后完整的剖取肿瘤块,称重。   Western blot法测量经不同浓度大黄素作用和大黄素联合顺铂作用后裸鼠肿瘤组织中凋亡相关蛋白的表达情况。   结果:Emodin对卵巢癌SKOV3细胞和卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用研究:应用MTT法检测不同浓度的大黄素(10,20,40,and80μM)作用于SKOV324小时后的生长率,结果显示:抑制率分别为:空白对照组0.79%±9.72%;大黄素10μM组8.18%±5.0%;大黄素20州组13.32%±5.39%;大黄素40μM组25.54%±9.90%;大黄素80μM组39.25%±9.13%。大黄素20μM作用于SKOV3细胞24小时后,细胞凋亡率仅10.56%;大黄素40μM作用于SKOV3细胞可以引起27.03%细胞的凋亡;大黄素80州作用于SKOV3细胞凋亡细胞为45.96%。应用westernblot法检测随着大黄素的浓度升高卵巢癌细胞株中凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达水平增加,抑制细胞凋亡和调节细胞增殖的survivin表达降低,显示大黄素在体内能够下调靶蛋白survivin的翻译水平,同时增加凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-9的翻译水平。大黄素对裸鼠皮下肿瘤生长的影响:治疗前各组裸鼠肿瘤大小差异无统计学意义(P>0.05),治疗结束后大黄素低、中、高剂量组RTV分别为5.23±0.24、3.38±0.17、2.17±0.31,与模型组(RTV为8.45±0.47)相比差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明大黄素各剂量均有抑制移植瘤生长的作用。   Emodin联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞和卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用研究:   应用MTT法检测大黄素单独或联合顺铂作用于卵巢癌细胞系SKOV3的生长抑制作用,结果显示:大黄素20单独作用于SKOV3时生长抑制率为14.93%±6.41%;顺铂5μM单独作用于SKOV3细胞时的生长抑制率约为31.86%±7.70%;但与大黄素20μM联合作用时,生长抑制率为53.50%±4.70%,空白对照组的生长抑制率为0.91%±6.63%。应用流式细胞仪检测大黄素单独或联合顺铂作用于卵巢癌细胞系SKOV3时的细胞凋亡作用,结果显示:顺铂5μM单独作用于SKOV3细胞的凋亡率为23.35%,大黄素20μM与顺铂5μM联合作用时细胞的凋亡率升高到60.07%,大黄素20μM单独作用时凋亡率为12.61%。大黄素联合顺铂对裸鼠皮下肿瘤生长的影响:治疗前各组裸鼠肿瘤大小差异无统计学意义(P>0.05),提示各组肿瘤体积具有可比性。治疗结束后大黄素组、顺铂组、大黄素顺铂联合作用组RTV分别3.32±0.09、3.54±0.17、1.86±0.25,与模型组(RTV为8.79±0.32)相比差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明大黄素联合顺铂能够更好抑制移植瘤生长的作用。   结论:   1、Emodin能够诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡能够明显抑制细胞的增殖,具有浓度依赖性;Emodin能够通过提高Caspase3、Caspase9和降低survivin的表达,增强卵巢癌细胞株SKOV3对顺铂的药物敏感性并促进细胞凋亡。   2、Emodin对人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性;通过提高Caspase3、Caspase9和降低survivin的表达,诱导裸鼠移植瘤中肿瘤细胞发生凋亡。   3、通过研究表明Emodin增强卵巢癌细胞株SKOV3对化疗药物顺铂的敏感性,Emodin联合化疗药物顺铂作用的裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,强于两者单独作用时,说明Emodin在化疗药物对肿瘤生长抑制促进凋亡方面有协同作用。
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