厚朴酚与和厚朴酚透皮吸收及抗增生性瘢痕机制研究

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目的:  研究厚朴酚与和厚朴酚的透皮吸收,筛选出最佳促透剂,考察不同浓度厚朴提取物对瘢痕的作用,通过测定瘢痕组织中相关蛋白含量,探讨其可能的作用机制。  方法:  1.建立厚朴酚与和厚朴的HPLC测定方法,以离体SD大鼠腹部皮肤为渗透屏障,以厚朴酚与和厚朴酚为模型药物,采用改良的Franz扩散池法,考察厚朴酚与和厚朴酚在四种促透剂作用下的促透效果,筛选出最佳促透剂。  2.建立兔耳瘢痕模型,分为正常组、模型组、空白基质组以及低、中、高浓度厚朴提取物组,配制厚朴提取物制剂,给药一个月后,测定瘢痕组织中相关蛋白表达。  结果:  1.厚朴酚的标准曲线方程为Y=15.39X+3.700(r2=0.9999),在1.065~213.0μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。和厚朴酚的标准曲线方程为Y=11.38X+6.400(r2=0.9999),在0.750~150.0μg·mL-1浓度范围内线性关系良好。  2.在促透剂氮酮的作用下,厚朴酚与和厚朴酚的透皮性能均提高,氮酮对厚朴酚的增渗倍数显著高于和厚朴酚,均以3.0%的氮酮促渗效果最佳。  在促透剂薄荷醇的作用下,厚朴酚与和厚朴酚的透皮性能均提高,薄荷醇对和厚朴酚的增渗倍数略等于厚朴酚,但没有明显差异。  在促透剂冰片的作用下,和厚朴酚的透皮性能明显提高,3.0%的冰片促透效果最好;低浓度的冰片抑制厚朴酚的透皮吸收,而高浓度冰片则起促进作用。  在促透剂二乙二醇单乙基醚(Transcutol P,TP)的作用下,和厚朴酚的透皮性能提高比较明显,以5.0%TP的促透效果最佳,而厚朴酚则随着TP浓度的升高,透皮吸收抑制增强。  厚朴酚在3.0%的氮酮作用下,促透效果最好;和厚朴酚在5.0%的TP作用下,促透效果最好。  3.在各种促透剂的作用下,厚朴酚与和厚朴酚的储存效应也各具特点。  在促透剂氮酮的作用下,和厚朴酚释放常数大于厚朴酚。氮酮为1.0%时,厚朴酚的释放常数最大,随着促透剂氮酮浓度增大,其释放常数变小;氮酮为3.0%时,和厚朴酚具有最大的释放常数。  在促透剂薄荷醇的作用下,和厚朴酚释放常数大于厚朴酚。随着促透剂薄荷醇浓度增加,厚朴酚的释放常数没有明显改变,而和厚朴酚释放常数则逐渐增大,薄荷醇浓度为5.0%时,和厚朴酚释放常数最大。  在促透剂冰片的作用下,和厚朴酚释放常数大于厚朴酚。当冰片浓度为3.0%时,厚朴酚具有最小的释放常数,当促透剂冰片浓度增大或者减小时,释放常数都会增大;当冰片浓度为3.0%时,和厚朴酚具有最大的释放常数。  在促透剂TP的作用下,和厚朴酚具有更优的释放常数。当TP浓度为1.0%时,厚朴酚具有最大的释放常数,随着TP浓度变大,释放常数变小;当TP浓度为1.0%时,和厚朴酚具有最大的释放常数,随着TP浓度变大,释放常数变小。  厚朴酚与和厚朴酚都是在3.0%的氮酮作用下,具有最大的释放常数。  4.在不同实验条件下,皮肤中厚朴酚与和厚朴酚含量具有完全不同的表现。加促透剂后药物在皮肤中的含量明显增加;同等条件下,和厚朴酚在皮肤中的含量明显高于厚朴酚。  促透剂氮酮、薄荷醇和TP为3.0%时,厚朴酚在皮肤中的药物含量最高,随着促透剂冰片浓度的增加,皮肤中厚朴酚含量增加。促透剂氮酮和冰片可显著增加和厚朴酚在皮肤中的含量,但随着相应促透剂浓度的增加,皮肤中药物含量变化不大;促透剂薄荷醇浓度为3.0%时,皮肤中和厚朴酚含量最低;促透剂TP对和厚朴酚的促透效果不明显。  氮酮浓度为3.0%时,和厚朴酚在皮肤中的含量最高;TP浓度为3.0%时,厚朴酚在皮肤中的含量最高。  5.根据透皮吸收、储存效应和皮肤中药物含量的结果,选择3.0%的氮酮和3.0%的TP作为最佳促透剂。  6.Masson染色结果表明厚朴提取物可以缓解瘢痕增生。  7.与瘢痕模型组相比,厚朴提取物给药组Caspase-9蛋白表达增高,TGF-β1蛋白、TIMP-1蛋白和MMP-1蛋白表达降低。  结论:  1.在不同促透剂作用下,厚朴酚与和厚朴酚的透皮吸收、储存效应及皮肤药物滞留量具有显著差异,3.0%的氮酮和3.0%的TP作为厚朴提取物最佳促透剂。  2.厚朴提取物可以抑制瘢痕增生,其机制可能是通过促进Caspase-9蛋白表达,抑制TGF-β1蛋白、TIMP蛋白和MMP-1蛋白表达。
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