TGF-β1联合H2O2与TNF-α刺激成纤维细胞NIH3T3性状改变,促进肿瘤微小病灶的形成

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目的:探讨TGF-β1联合TNF-α与H2O2如何诱导小鼠成纤维细胞NIH3T3发生形态功能的改变,并且促进了与其共培养的小鼠肝癌细胞H22的体外增殖与体内生长,以及肿瘤微小病灶的形成。  方法:  (1)单独使用TGF-β1,TNF-α,H2O2或者三因素联合刺激NIH3T3细胞5天,倒置显微镜下观察细胞形态的改变。  (2)将刺激5天的NIH3T3细胞与CFSE标记的H22细胞共培养1天,流式细胞仪检测H22细胞的分裂增殖情况。  (3)将使用不同因子刺激5天的NIH3T3细胞与H22细胞用3:1的比例混合后共接种在小鼠右侧大腿肌肉中,将小鼠饲养7天后处死,手术取出左右侧大腿,称重后计算瘤重(瘤重=右侧大腿重量-左侧大腿重量)。  (4)将正常或者三因素联合刺激的NIH3T3细胞与数量递减的H22细胞用3:1比例混合共接种在小鼠右侧大腿肌肉中,将小鼠饲养7-30天后处死,手术取出左右侧大腿,称重计算在H22细胞接种数目减少情况下肿瘤微小病灶是否形成。  结果:  (1)使用TGF-β1+TNF-α+H2O2联合刺激NIH3T3细胞5天后,细胞形态由星形扁平状转变成梭形纺锤状,且细胞间接触抑制减小,细胞核增大。证明了3因素联合刺激后NIH3T3细胞形态发生了改变。  (2)使用各种因子刺激5天后的NIH3T3细胞与CFSE标记后的H22细胞在六孔板中共培养1天后,收集上层悬浮H22细胞,流式细胞仪检测细胞增殖速度比单独培养的H22细胞加快。  (3)将NIH3T3细胞与H22细胞共接种在小鼠大腿肌肉中,培养7天的肿瘤重量比单独 H22细胞接种的肿瘤重量明显增加。  (4)将三因素刺激的NIH3T3细胞与H22细胞共接种在小鼠大腿肌肉中,致瘤所需要的H22细胞数比单独接种时的H22细胞数明显减少。  结论:TGF-β1单独或联合TNF-α与H2O2刺激正常成纤维细胞NIH3T3发生形态与功能的改变,增加了肿瘤细胞H22的增殖分裂能力,导致肿瘤明显增大,形成微小病灶所需肿瘤细胞数明显减少。
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