目的 探讨吉西他滨对人胆管癌细胞的放射增敏作用。 材料与方法 取指数生长期的胆管癌细胞(QBC939)，采用细胞克隆形成分析法检测吉西他滨的单药毒性，确定10﹪的抑制浓度(IC10)、50﹪的抑制浓度(IC50)和90﹪的抑制浓度(IC90)作为下一步实验的药物浓度。将QBC939细胞分为对照组、单纯药物组、单纯照射组、药物加照射组及照射加药物组。X射线照射剂量为0Gy、1Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy，采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线。计算放射增敏比(sER)，SER=Do(单纯照射)/Do(药物加照射组或照射加药组)。 结果 吉西他滨对QBC939细胞的1C10、IC50和IC90值分别为0.1nM/L、11.0nM/L、21.5nM/L。低浓度(IC10浓度)吉西他滨与X射线联合作用无论是照射前还是照射后给药均无放射增敏作用(SER分别为1.007和1.005)。中浓度(IC50浓度)扣除药物自身毒性后药物加照射组放射增敏比为2.5，放射后加药组SER为0.87。高浓度(IC90浓度)吉西他滨与x射线联合作用扣除药物自身毒性后照射前给药具有一定的放射增敏作用(增敏比为1.98)，而照射后给药无明显的放射增敏作用(增敏比均为1.06)。 结论 吉西他滨对体外培养的胆管癌细胞具有一定放射增敏作用。随药物浓度的不同呈现不同的放射增敏作用，以IC50剂量浓度放射增敏效果最好。序贯方式也会不同程度地影响药物的增敏作用，提示吉西他滨联合放射线照射应注意药物浓度的选择及序贯方式。 第二部分 目的 探讨吉西他滨对人胆管癌细胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用。 材料与方法 建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型，随机分为5组，每组12只：空白对照组、单纯药物组、单纯放射组、药物加照射组、照射加药物组。单纯照射组、药物加照射组、照射加药物组根据照射剂量的不同各分为3个亚组。对照组经腹腔注射生理盐水，单纯药物组经腹腔注射吉西他滨50mg/kg；药物加照射组经腹腔注射吉西他滨50mg/kg，24小时后分别进行单次10 Gy、15 Gy、20 Gy的照射；照射加药物组分别进行单次10 Gy、15 Gy、20 Gy的照射，照后即刻腹腔注射吉西他滨50mg/kg。每隔1天测量移植瘤的最大径及其最小径，计算肿瘤体积及生长延缓天数等，利用增敏系数(EF)评价不同的治疗模式下吉西他滨的放射增敏作用。 结果 单纯照射组与照射加药物组肿瘤生长情况相似，肿瘤生长受到不同程度的抑制；照射加药物组10 Gy、15 Gy、20 Gy 3个亚组的EF值分别为1.14，1.17，1.27；药物加照射组较其他实验组肿瘤生长明显受到抑制，尤以20Gy亚组最明显，药物加照射组10Gy、15Gy、20Gy 3个亚组的EF值分别为1.14，1.72，2.08；20Gv亚组延缓天数最长，且大于单纯药物组和单纯照射组延缓天数之和。 结论 吉西他滨对人胆管癌裸鼠移植瘤具有一定的放射增敏作用，不同的序贯方式会不同程度地影响药物的增敏作用，照射前24小时给予吉西他滨具有明显的放射增敏作用。 第三部分 目的 应用基因芯片筛选胆管癌放射敏感性相关基因。 材料与方法 建立人胆管癌裸鼠移植瘤模型，随机分为对照组(2只)和实验组(8只)。实验组根据照射剂量的不同随机分为两组，每组4只，分别给予10Gy和20Gv单次照射。单次照射后分别于6h和24h处死荷瘤鼠，离体新鲜肿瘤组织，利用Trizol法提取RNA。选择人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片，通过逆转录制备荧光标记的cDNA探针并与芯片杂交，经扫描获取图像，计算机分析两组表达差异。差异基因筛选标准为ratio>2为上调基因，ratio<0.5为下调基因。 结果 胆管癌放射敏感性相关基因筛选的实验显示，照射10Gy 6h后有116个基因是差异表达的，68个基因上调，48个基因下调；照射后24h有101个基因是差异表达的，44个基因上调，57个基因下调。照射20Gy后6h有102个基因是差异表达的，44个基因上调，58个基因下调： 24h有130个基因是差异表达的，49个基因上调，81个基因下调。利用BoaoMiner软件对上述表达的差异性基因进一步进行特异性统计学检验，分析出13条基因，其中表达下调者8条基因，5条基因表达上调。 结论 利用基因芯片可以筛选出胆管癌放射敏感性基因。