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本论文主要研究生防细菌2P24(P.Fluorescens)、B99-2(Bacillus subtilis)、CPF10(P.Fluorescens)以活体制剂形式引入到甜瓜根围土壤后,对土壤微生物的影响。结合传统技术平板培养计数法、MPN法和分子技术荧光标记、末端标记限制性片段长度多态性(T-RFLP)方法,考察土壤微生物的生物量和多样性变化,以评估生防菌的田间影响。
传统培养方法研究的结果表明,土壤中真菌、细菌和放线菌的数量依季节的变化而变化。其中CPF10、B99-2开花期后明显抑制土壤细菌和真菌的生长,2P24对土壤细菌和真菌影响较弱。它们对放线菌均有促进作用,随时间推移逐渐恢复。生防菌施用初期可抑制氨化细菌、固氮菌和硝化细菌,收获期,2P24和B99-2促进自身固氮菌的生长,结果期B99-2处理的硝化细菌含量也有所提高。亚硝化细菌在三种生防菌影响下,含量明显提高。但随着时间的推移,对N循环的功能微生物的影响逐渐减弱。
荧光蛋白标记的生防菌在田间释放后,数量逐渐降低,荧光假单胞菌2P24和CPF10的存活能力相对弱于枯草芽孢杆菌B99-2,收获期时2P24和CPF10土壤中的含量要比B99-2低一个数量级左右。
土壤DNA提取方法经优化后,采用T-RFLP方法检测到田间土壤中具有40-60个TRF菌群,相对含量1.5%以上的TRF菌群有20个左右。含量最高的菌群是TRF240,在24%左右。生防菌对其中无明显影响。TRF208、TRF213、和TRF513等含量较高的片段在不同生育期和不同处理的土壤中都能检测到,这些菌群受到生防菌的一定影响。TRF208、TRF213片段菌群有一些功能菌,病原菌和有部分生防潜力的细菌,该菌群比较复杂,因此生防菌的影响就具有不确定性。TRF513菌群主要一些功能菌、有生防潜力的细菌等,三种生防菌在不同的甜瓜生育期表现出对该菌群的调控作用不同,在开花期到结果期均对该菌群有抑制作用,而在其它生育期有的生防菌株还有促进作用。
TRF348和TRF367等片段的菌群为受生防菌作用非常明显的菌群,生防菌的处理明显抑制或促进了这些菌群的生长。TRF348片段菌群主要有一些重要的功能菌。结果表明三种生防菌抑制该菌群的生长,可能起到负调控作用。TRF367片段菌群主要含有一些病原菌。结果表明生防菌明显抑制该菌群的含量,起到促进土壤健康的重要作用。
综上分析,三种生防菌都对土壤中一定微生物有影响,但由于土壤中含有的微生物生物量和多样性都比较丰富,有良好的缓冲能力,所以并未造成巨大的冲击。同时结果表明在自然环境下,土壤微生物群落结构也处在动态变化过程。