论文部分内容阅读
伪中间型葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius，SP)是2005年发现的一种新的凝固酶阳性葡萄球菌，能够引起犬、猫等动物感染和发病。耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius，MRSP)对兽医临床上使用的多种抗菌药物表现耐药，逐渐成为累积多种耐药基因的“蓄水池”。本论文初步调查了广东省宠物源耐甲氧西林伪中间型葡萄球菌的流行情况，旨在为指导小动物临床合理用药提供依据。 从小动物临床采集皮肤、耳部和鼻腔等部位的样品，分离鉴定伪中间型葡萄球菌，并采用琼脂稀释法和纸片扩散法对伪中间型葡萄球菌进行26种抗菌药物的敏感性检测，采用PCR方法检测mecA基因。结果从898个样品中共分离到144株伪中间型葡萄球菌，检出率为16.0％，皮肤、耳部和鼻腔的伪中间型葡萄球菌检出率分别为20%(64/319)、17.8%(64/359)和7.5%(3/40)，mecA基因检测结果显示有69株(47.9%)为MRSP。伪中间型葡萄球菌对氨苄西林、红霉素、阿奇霉素、克林霉素、四环素和复方新诺明的耐药率均在80%以上，对利福平和阿米卡星的耐药率低于7%，对万古霉素、利奈唑胺、喹奴普汀一达福普汀和替考拉宁均敏感。大部分(>69%)MRSP对红霉素、克林霉素、泰乐菌素、阿奇霉素、复方新诺明、四环素、环丙沙星和恩诺沙星等抗菌药物表现耐药。 采用PCR方法对69株MRSP分离株进行耐药基因、毒力基因和整合子的检测。结果显示，69株MRSP中耐药基因blaZ、ermB、tetK、tetM、aac(6)-Ie-aph(2)-Ia、dfrG的携带率分别为63.8%(44/69)、79.7%(55/69)、24.6%(17/69)、60.9%(42/69)、76.8%(53/69)和66.7%(46/69)，其他检测到的耐药基因有linA和cat1，分别有5株。中间型葡萄球菌表皮脱落素基因的检出率为87.0%(60/69)，未检测到杀白细胞毒素基因。对所有MRSP分离株进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子检测，均未检测到任何一类整合子。 采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌染色体mec盒(SCCmec)、葡萄球菌蛋白A(spa)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)等分型方法调查了69株宠物源MRSP分离株的分子流行情况。结果69株MRSP共显示出24种不同的MLST分型结果，主要型号为ST4(n=9)，ST5(n=8)和ST95(n=7)，发现了8个新的序列型号。只有15株MRSP spa分型成功，共得到6种spa型号，其中t05是主要类型，其次为t06和t09。SCCmec分型结果显示，SCCmecV(n=33)是最主要的流行类型，其他的类型为SCCmecⅦ(n=13)、SCCmecⅡ-Ⅲ(n=7)和SCCmecⅢ(n=4)。PFGE结果显示，69株MRSP用Sma I酶切呈现29种不同的酶切图谱，Apa I酶切显示20种不同的图谱。 本研究结果表明，广东省宠物源伪中间型葡萄球菌对抗菌药物的耐药现象比较严重，MRSP发生率高且MRSP存在较高的基因多态性，与我国北方地区以及欧美地区的MRSP流行情况存在差别。本研究结果提醒我们应高度重视宠物源细菌耐药问题，迫切需要规范国内小动物临床用药并加强抗菌药物使用监管。