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通过对Mass血清型传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)S1基因核苷酸及推导氨基酸序列的分析，筛选出一段保守性较好、抗原指数较高的区域(n.t.1144-1611)，针对该区域设计特异性引物，以IBV M41毒株的S1基因为模板，用PT-PCR方法扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1)。利用该片段两端的限制性内切酶位点将其定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中，获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1。将该重组质粒转入表达菌Origami(DE3)中，用IPTG进行诱导表达，获得了大小约为34 KD的重组蛋白poly156S1。Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应。
用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c小鼠，按常规方法进行单克隆抗体的制备，成功获得了针对M41 S1蛋白的三株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9，其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b，轻链均为K型。按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化，并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析，结果表明，腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218，1.37×221，1.31×216；单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高。Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性。
以单抗8D6为包被抗体、IBV M41尿囊液毒为夹心抗原、兔抗IBV多抗为二抗建立了IBV抗原捕获ELISA方法。一系列实验结果表明，该方法重复性好，批内重复值变异系数小于10％；特异性强，仅对IBV呈阳性反应，而与禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)、减蛋综合征病毒(EDS76V)不存在交叉反应；敏感性较高，至少能检测到103.78个EID50的M41病毒粒子；反应谱较广，能与至少6株IBV标准毒株呈阳性反应。以RT-PCR方法与新建立的IBV抗原捕获ELISA方法进行平行试验，对52份经鸡胚增毒后的人工感染IBV M41株雏鸡的咽肛棉拭子样品进行检测，二者的阳性检出率均为100％。由此可见，本研究所建立的IBV抗原捕获ELISA方法可用于IBV的检测。