大鼠KIAA0280在急性脑缺血中的差异表达及其转基因细胞株的建立

来源 :中山大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hoko0428001
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  本实验室在前面的研究中利用荧光差异显示RT-PCR(FDDRT-PCR)技术研究了大鼠急性脑缺血中缺血与非缺血脑区差异表达的基因。其中有一条在缺血区上调较明显,经克隆测序和同源性分析后发现该基因与人和小鼠KIAA0280基因相似性较高,因而将其命名为大鼠KIAA0280基因。   为探索大鼠KIAA0280是否参与缺血性脑损伤的病理生理过程并发挥作用,以及其机制。本研究首先利用MCAO模型,在mRNA水平确认了大鼠KIAA0280在缺血区的上调表达,经序列比对推测己报道的小鼠mKIAA0280序列有误并在WesternBlot检测中得到证实;从蛋白水平分析了大鼠KIAA0280在正常雌性大鼠中的组织表达谱,发现该蛋白在正常大鼠的胰腺、胸腺、大脑皮层、小脑等组织表达量较高,而在肾、小肠、胃等组织则表达量较低;构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-KIAA0280,并利用脂质体转染法将其转染至PC12细胞,建立了稳定表达的细胞系,为以后的功能研究奠定了良好的基础。   第1章大鼠KIAA0280cDNA的克隆及其表达研究   结论:大鼠KIAA0280可能参与了脑缺血的病理生理过程;推测小鼠mKIAA0280报道序列有误;KIAA0280在大鼠胸腺、大脑皮层、小脑、胰腺等组织表达量较高。 第2章pcDNA3.1(-)-KIAA0280真核表达载体的构建及其在PC12稳定表达细胞株的建立   验证了大鼠KIAA0280基因的存在和表达,但其功能并未得到证实。本研究拟构建该基因的重组表达载体,并将其转染至真核细胞,建立稳定表达细胞系。为以后功能研究奠定基础。   结论:正确构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-KIAA0280;建立了PC12-KIAA0280稳定表达细胞株。
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