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为了改善山羊体外受精技术，建立一套比较完善的山羊体外受精的操作体系，并为即将进行的转基因动物的研究提供良好的技术平台，本实验探讨了体外受精各个环节中报道得比较多的影响因素对山羊体外受精的影响，提出了一套优化的方法体系。 实验比较了切剖法和抽吸法从屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母细胞数。结果表明切剖法采集得到的可用卵母细胞数显著高于抽吸法(3.70枚／卵巢vs2.31枚／卵巢)。用切剖法采集不同季节屠宰山羊的卵巢卵母细胞，结果表明不同季节采集的卵母细胞数差异显著，非繁殖季节的山羊卵巢可采集到更多的可用卵母细胞(4.13枚／卵巢vs3.42枚／卵巢)。 分别统计繁殖季节和非繁殖季节采集得到的卵母细胞的成熟率，结果表明不同季节采集的卵母细胞体外成熟率有显著差异(61.3％vs72.5％)。山羊卵巢在20～24℃、25～29℃、30～35℃保存6～8小时后，切剖采卵，成熟率分别为68.5％、67.9％和54.2％。结果表明在30℃以上保存的卵巢中采集的卵母细胞成熟率显著低于20～30℃之间存放的卵巢采集的卵母细胞成熟率。用FSH／LH作为激素来源和用HMG作为激素来源对卵母细胞进行成熟培养，成熟率之间无显著差异(67.5％vs70.2％)。成熟液中添加FCS和EGS时，成熟率分别为70.3％和71.5％，无显著差异。另外，卵母细胞的直径为φ＜150μm、150μm＜φ＜160μm、φ＞160μm时，成熟率分别为0.74％、69.5％和71.6％，表明卵母细胞直径小于150μm时不能用于体外成熟。成熟培养时间为16小时、20小时、24小时和24小时的成熟率分别为22.6％、31.2％、57.2％、72.4％，表明27小时的成熟培养后卵母细胞能最大程度地达到核质成熟。 精子用离心法、上游法、稀释法处理后，得到的活力和获能率表明，上游法更有利于山羊的精子处理。洗涤后的精子放入含有50μg／ml的肝素的 TALP、m DM、m H－MI 99中获能，结果表明 mDM液处理山羊精子的效果明显优于 TALP和 mH－M199液。精子获能45分钟、l’h时、2 ／J’时、3小时获能率分别为：12．4％、15．8％、48．7％、引力％，结果表明：2～3 ／J’时获能率显著高于1小时以内。用IA23 87处理山羊精子，0二，0．5，lp M时的获能率分别为475％、45％、53．8％，0二v M处理的精子的活力显著高于其余两组：处理2分钟、5分钟和10分钟的获能率分别为36％、兆％、53％，1小时、5小时、15小时精子活力分别为：乃％、的％、23％：乃％。42％、24％；53％、32％、6％。结果表明精子在IA231 87中处理5分钟时，获能率和活力都较高。精子在含 FCS，BSA，FCS＋BSA的 IA23 87获能液中的获能率分别为叱22％，的．8％，引二％，差异不显著：1小时，5小时，15小时活力分别为0．7几0．50、0．ZO；O．50、O．35、O．IO：0．60、0．40、0．IO。可见FCS对精子的存活有利。 精卵在 TALP、mDM、mH－MI 99中共培养 17小时，其受精率分别为52．3％、50．8％、41．7％，在 TALP和 m DM液中的受精率显著高于在mH－MI 99中。精卵在含有亚牛磺酸或肝素或PHE的TALP液中受精17 ，J＼时，得到的受精率分别为：52．5％、45．3％、37．6％，可见精子活力激动剂对受精率并无提高。受精时间为 8小时，17小时，24小时的受精率分别为10．2％、53．2％、陀＊％，表明精卵共同作用间小时才能达到较好的受精效果。 用 TCM199，mCRlaa－TCM199，BO－TCM199，mCRlaa与山羊输卵管上皮细胞共培养胚胎，其卵裂率分别为45．9％、50．5％、46．4％、45．l％，结果表明卵裂率在四组培养液之间无显著差异。在没有输卵管上皮细胞共培养时，培养液中添加或不添加氨基酸混合物、添加血清和（或）BSA对培养胚胎的卵裂率无显著影叫，但在 mCRlaaBSA、mCRlaaFCS和 mCRIaaBSAFCS中的＞8细胞胚胎发育率分别为 32．4％、3．8％，35石％，显著高于mCRIBSA，mCRIFCS 和 中的胚胎发育率。结果表明，氨基酸和FCS（BSA）联合使用更适宜于山羊体外受精胚胎的体外发育。胚胎与卵丘细胞或输卵管上皮细胞共培养，其卵裂率和＞8细胞发育率分别为：灼．8％， V［！26．2％；47二％，30．7％。结果表明，山羊的输卵管上皮和卵丘细胞对体外受精胚胎的发育影响无显著差异。 根据以上实验结果，我们提出如下山羊体外受精的优化方法体系：屠宰山羊卵巢取下后在20～30aC储存运输，送回实验室后用切剖法采集卵母细胞，挑选直径大于 150 u m的卵母细胞进行体外成熟，培养液中添加 HMG和 EZ，培养时间为 27小时、精子用上游法处理，在 ZDM液中获能 2～3小时后可用于体外受精；若用lA23旧7处理山羊精子，则浓度为O．2卜M，处理时间为 smins，添加 FCS。早期胚胎用 mCRlaa＋FCS（BSA）培养，共培养细胞类型对发育率无明显影响。