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目的:探索并证实抗痨中医方药对巨噬细胞表面模式识别受体表达的调控作用的存在。同时,通过观察含药血清对巨噬细胞吞噬能力、杀菌能力的影响,及相关细胞因子、杀菌性酶类的变化,以验证各类抗痨方药引起的抗菌效果。以期阐明抗痨中医方药治疗结核病的可能作用靶标。
方法:①按常规方法分别制备沙参麦冬汤、百合固金汤、人参蛤蚧散含药兔血清及空白兔血清。以含药血清作用U937单核巨噬细胞24h后,分别采用RT-PCR法和流式细胞术检测巨噬细胞表面CR1、CR3、CD14、CD43、TLR2及TLR4mRNA和蛋白表达水平。同时设空白兔血清为对照。②巨噬细胞经含药血清干预24h后,以BCG分别对其作用24h、48h后收集细胞,进行结核分枝杆菌抗酸染色,统计24h组巨噬细胞的吞噬百分率、吞噬指数,以反映巨噬细胞吞噬能力的强弱;统计48h组巨噬细胞的含菌百分率、含菌指数,以反映巨噬细胞杀菌能力的强弱;同时采用ELISA法检测未经BCG作用时、经BCG作用24h后各组细胞IL-10、IL-12、MPO分泌量,采用生化方法检测以上各组细胞iNOS的活力。
结果:①经中药含药血清作用24h后,沙参麦冬汤、百合固金汤、人参蛤蚧散在mRNA和蛋白水平上对巨噬细胞表面模式识别受体的表达均表现出不同的调控作用。其中,沙参麦冬汤、百合固金汤主要表现为对结核杆菌II型PRRs的上调作用(P<0.05);人参蛤蚧散则主要表现为对结核杆菌I型受体的下调作用(P<0.05)。②经BCG作用24h后,三方均可使巨噬细胞吞噬能力增强(P<0.05);48h后,三方亦可使巨噬细胞杀菌能力显著增强(P<0.05)。但人参蛤蚧散组细胞的吞噬、杀菌能力均不及另两方(P<0.05)。沙参麦冬汤可使巨噬细胞IL-10、IL-12、MPO分泌量增加;百合固金汤、人参蛤蚧散仅使IL-10、MPO分泌量增加,不过可拮抗BCG引起IL-12分泌量减少的现象。三方对iNOS活力均无显著影响。
结论:实验结果显示,抗痨方药可通过对巨噬细胞表面模式识别受体的调控产生抗痨药理作用;而且滋阴方药与补气方药具有明显不同的药理作用格局;巨噬细胞表面模式识别受体可因对方药调节反应的不同而分为两类。