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目的：本课题以人体发热机理为试验原理，研究二类体外模型：①动物全血及单核细胞，②人源单核细胞系，考察它们用于检测热原的可行性，以期建立新的体外热原检测体系，并对其进行应用研究。 方法：(1)采用大鼠全血，以细胞因子（TNF-α）为检测指标；采用大鼠外周血单核细胞，以细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）为检测指标；(2)采用猪全血，以细胞因子（IL-1β、IL-6）为检测指标；(3)采用家兔外周血单核细胞，以细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）为检测指标；(4)采用人源单核细胞系 THP1，以 TNF-α（THP1细胞液 V:热原样品 V=4:1及1:1）和Neo（THP1细胞液 V:热原样品 V=4:1）为检测指标；(5)采用人源单核细胞系28SC，以细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）为检测指标，考察无活化物存在以及活化物 calcitriol浓度为10、100ng/ml时活化28SC后对各类热原的反应活性，确定检测指标以及活化物 calcitriol的浓度，建立28SC热原检测体系，及研究不同传代次数（15、45代）对28SC稳定性的影响；(6)采用本实验室构建的热原复合物和内毒素法检查不合格的样品 b型流感疫苗，对人源单核细胞系28SC进行应用性研究。 对上述试验进行热原检测的可行性研究。 结果：(1)大鼠全血-TNF-α-法，大鼠外周血单核细胞-IL-1β、IL-6法对LPS不能检测到0.5EU/ml（前期结果表明，LPS引起家兔体温升高0.6℃的最小浓度为0.5EU/ml），不适用于检测热原；大鼠外周血单核细胞-TNF-α法，对LPS可检测到0.25EU/ml，适用于检测热原；(2)猪全血-IL-1β法对LPS的最低检测限为0.125EU/ml，线性范围为0.0125~0.5EU/ml，R=0.9754；猪全血-IL-6法对LPS的最低检测限为0.0625EU/ml，线性范围为0.0625~0.5EU/ml，R=0.9959，猪全血-IL-1β、IL-6法适用于检测热原；(3)兔外周血单核细胞-IL-1β、IL-6、TNF-α法对LPS不能检测到0.5EU/ml，不适用于检测热原；(4) THP1-TNF-α法的两种孵育体系对LPS均不能检测到0.5EU/ml；THP1-Neo法对LPS不能检测到0.5EU/ml，两种指标均不适用于检测热原；(5)无活化物存在时，28SC-IL-1β、IL-6、TNF-α法对LPS不能检测到0.5EU/ml；活化物 calcitriol浓度为10ng/ml时，28SC- IL-1β、TNF-α法对LPS不能检测到0.5EU/ml，28SC-IL-6法对LPS可检测到0.25EU/ml，对LTA不能检测到0.5μg/ml(前期结果表明，LTA引起家兔体温升高0.6℃的最小浓度为0.5μg/ml），对Zymosan不能检测到16.0μg/ml(前期结果表明，Zymosan引起家兔体温升高0.6℃的最小浓度为16.0μg/ml）；活化物 calcitriol浓度为100ng/ml时，28SC-IL-1β、TNF-α法对LPS可检测到0.5EU/ml，对LTA不能检测到0.5μg/ml，对Zymosan不能检测到16.0μg/ml，28SC-IL-6法对LPS可检测到0.25EU/ml，最低检测限可达到0.031EU/ml，线性范围为0.031~0.5EU/ml，R=0.9432，对LTA可检测到0.5μg/ml，对Zymosan可检测到16.0μg/ml，该体系适用于检测热原；确定28SC热原检测体系的活化物 calcitriol浓度为100ng/ml，检测指标为细胞因子 IL-6；经 LPS刺激后，45代28SC各剂量组与15代相应剂量组 IL-6含量之间无显著性差异，对LPS的最低检测限均可达到0.031EU/ml，线性范围均为0.031~0.5EU/ml，R15=0.9975，R45=0.9961；(6)对于热原复合物，28SC热原检测体系对其最低可检测到其16倍稀释液，而同稀释倍数样品不能引起家兔法体温升高，检测方法灵敏度前者高于后者，对于 b型流感疫苗，28SC热原检测体系与细菌内毒素法判定结果一致。 结论：(1)动物全血及单核细胞类模型：大鼠外周血单核细胞-TNF-α法、猪全血-IL-1β、IL-6法适用于检测热原，但其适用性尚需进一步研究；(2)人源单核细胞系类模型：体外28SC-IL-6热原检测体系，适用于检测热原，对LPS的最低检测限为0.031EU/ml，对LTA可检测到0.5μg/ml，对Zymosan可检测到16.0μg/ml；该体系稳定性好，在45代时尚有较好的热原检测活性；该体系对热原复合物的反应灵敏度较家兔法高，对b型流感疫苗的判定结果与细菌内毒素法判定结果一致。