植物LrgB同源物亚细胞定位多样性及其潜在意义研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:owen_climb
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植物LrgB蛋白与细菌LrgA和LrgB蛋白同源,是最早在拟南芥中发现的叶绿体被膜蛋白,在叶绿体发育和细胞程序性死亡(PCD)调控中占有重要作用。生物信息学分析表明,LrgB同源基因在植物界中普遍存在;部分植物存在不止一个LrgB同源蛋白,且部分蛋白不含有叶绿体过渡肽(CTP),说明LrgB亚细胞定位不具有单一性。本文主要研究植物LrgB同源蛋白亚细胞定位的多样性,以及它们在植物PCD调控中的重要功能。   在拟南芥atlrgB突变体叶片PI染色观察中,我们发现了细胞死亡,这是LrgB参与细胞死亡调控的又一有力证据。在LrgB同源蛋白亚细胞定位多样性的研究中,我们构建了绿藻,小立碗藓,拟南芥,水稻的LrgB同源蛋白的亚细胞定位表达载体并在拟南芥中分别表达它们,结果显示:绿藻OtLrgB定位于内质网;小立碗藓PpLrgB-1和拟南芥AtLrgB均定位在叶绿体被膜上;水稻OsLrgB-2定位在质膜上。以上说明具有保守跨膜结构域的植物LrgB亚细胞定位具有多样性,且这种定位多样性可能和功能多样性相关,这可能正是LrgB参与PCD调控的关键所在。   鉴于线粒体在植物PCD调控中扮演重要角色,我们构建了含线粒体过渡肽或不含过渡肽的拟南芥AtLrgB表达载体,结果显示它们分别定位到线粒体膜和内质网。为了研究植物LrgB的功能进化,我们还构建了含有叶绿体或线粒体过渡肽以及不含过渡肽的细菌CidAB/LrgAB体系的定位以及过量表达载体。目前我们已观察到定位到叶绿体膜的细菌LrgAB融合蛋白。此外,为了研究植物LrgB同源蛋白和PCD相关蛋白因子的亚细胞定位异同和相互作用,我们构建了一系列植物PCD相关基因的定位表达载体。   在对小立碗藓LrgB同源基因(PpLrgB)敲除方法的各种尝试中,我们已经筛选到PpLrgB-1的敲除克隆,接着我们将要对这些克隆进行分子水平的鉴定,并对LrgB在小立碗藓中的功能进行研究。PpLrgB基因敲除成功将有助于在不同物种中对LrgB的功能研究,功能保守性分析及进化分析。总之,我们确认了植物LrgB同源蛋白亚细胞定位的多样性,获得了各种遗传材料,为以后深入研究植物LrgB同源蛋白在叶绿体发育和PCD调控中的作用机理打下了基础。  
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